Nischarin在脊髓损伤修复中的作用及机制研究

摘要

目的:
　　探讨Nischarin在脊髓损伤(Spinal cord injury，SCI)后轴突再生中所起的作用，并初步探讨其分子机制。
　　方法:
　　1 Allen's撞击法建立Sprague-Dawley大鼠SCI模型;
　　2大鼠脊髓内微量注射针对Nischarin的shRNA质粒或siRNA小片段与转染试剂，进行体内转染;
　　3针对shRNA质粒转染，利用GFP荧光蛋白检测体内转染的效率;
　　4通过RT-PCR方法评价shRNA质粒或siRNA小片段抑制Nischarin的效果;
　　5连续6 w的旷场试验对大鼠进行BBB行为学评分，反映大鼠SCI后运动功能恢复情况;
　　6连续6w爬杆试验对大鼠进行后肢脚掌踏地角度FSA、尾根高度指数RHI和爬杆时间等测试，反映大鼠SCI后运动功能恢复情况;
　　7在SCI后6w，脊髓损伤平面以下注射荧光金示踪剂，逆行示踪法检测红核区的荧光金分布和强度，反映SCI后轴突再生的情况;
　　8 Western blot和免疫组化法检测脊髓损伤区GAP43蛋白的表达，反映轴突再生的情况。
　　结果:
　　1成功建立大鼠SCI模型;
　　2质粒注射区局部可见GFP荧光，提示shRNA质粒成功实现体内转染;
　　3 Nis-shRNA质粒和Nis-siRNA小片段均能有效抑制Nischarin的转录水平;
　　4体重监测结果证明各组间均无显著差异，提示shRNA和siRNA使用安全;
　　5旷场试验中，SCI+Nis-shRNA组的BBB运动功能评分较SCI+Ctl-shRNA组和SCI组高，差异显著;SCI+Nis-siRNA组的BBB运动功能评分较SCI+Ctl-siRNA组和SCI组高，差异显著;
　　6爬杆试验中，SCI+Nis-shRNA组和SCI+Nis-siRNA组的FSA均较各自的对照组和SCI组低，差异显著;SCI+Nis-shRNA组和SCI+Nis-siRNA组的RHI均较各自的对照组和SCI组高，差异显著;但爬杆时间在各组间无显著差异;
　　7逆行示踪实验中，SCI+Nis-shRNA组和SCI+Nis-siRNA组在红核的荧光金阳性神经元个数均多于各自的对照组和SCI组;
　　8 SCI后1w和6w，western blot结果显示，SCI+Nis-shRNA组和SCI+Nis-siRNA组的GAP43表达均较各自的对照组和SCI组多，差异显著;免疫荧光强度显示，SCI+Nis-shRNA组和SCI+Nis-siRNA组的GAP43表达较各自的对照组和SCI组多。
　　结论:
　　在损伤脊髓处抑制Nischarin的表达，有利于促进SCI大鼠的神经元轴突再生和运动功能的康复。

目录

声明

致谢

序言

摘要

主要缩略词

1 引言

2 材料和方法

2．1 材料

2．2 方法

2．3 统计学处理

3 结果

3．1 大鼠脊髓损伤模型的建立

3．2 Nis-shRNA转染

3．3 Nis-shRNA和Nis-siRNA转染效果评价

3．4 大鼠体重监测

3．5 旷场试验评估Nischarin被抑制后对SCI大鼠运动功能的影响

3．6 爬杆试验评估Nischarin被抑制后对SCI大鼠运动功能的影响

3．7 荧光金逆行示踪

3．8 抑制Nischarin增强了GAP43的表达

4 讨论

4．1 脊髓损伤实验模型的选择及建立

4．2 RNA干扰技术的运用

4．3 Nischarin参与脊髓损伤后的恢复过程

4．4 机制探讨

5 结论

参考文献

综述 基质金属蛋白酶影响中枢轴突再生的研究进展

作者简历