慢病毒介导RNA干扰抑制TPD52L2基因表达对人肺腺癌细胞A549增殖的影响

摘要

研究目的:
　　肺癌已成为我国首位恶性肿瘤死亡原因。已有研究发现TPD52家族在肿瘤增殖与凋亡过程中发挥了重要作用，但是TPD52家族在肺癌中的生物学中作用仍不明确。
　　研究方法:
　　通过构建表达shRNA的慢病毒，感染人肺腺癌细胞系A549细胞以敲减TPD52L2在A549细胞的表达水平。通过MTT，细胞克隆实验和细胞周期检测等观察TPD52L2表达降低后A549细胞的增殖变化。
　　研究结果:
　　本研究成功构建了表达shRNA的重组慢病毒，通过感染人肺腺癌细胞系A549细胞，TPD52L2在A549细胞的表达明显下降。TPD52L2表达降低后A549细胞在细胞增殖和克隆形成上都受到明显抑制。细胞周期检测提示TPD52L2表达降低后A549细胞在G2/M期增多，提示可能使细胞周期阻滞在G2/M期。
　　研究结论:
　　本研究发现通过体外敲减TPD52L2在人肺腺癌细胞A549细胞中的表达，在G2/M期阻滞细胞增殖，从而为临床靶向TPD52L2治疗肺腺癌提供重要线索。

目录

声明

致谢

论文说明

摘要

1 前言

2 实验材料

2．1 实验仪器和设备

2．2 常用实验材料与试剂

2．3 抗体

2．4 引物序列

2．5 细胞

3 实验方法

3．1 细胞复苏

3．2 细胞常规培养

3．3 细胞传代

3．4 细胞冻存

3．5 细胞RNA抽提

3．6 cDNA制备

3．7 qPCR检测

3．8 细胞总蛋白抽提

3．9 蛋白浓度测定和浓度均一化调整

3．10 Western blot检测蛋白的表达变化

3．11 RNAi慢病毒载体构建与包装

3．12 慢病毒感染

3．13 MTT生长曲线

3．14 细胞周期检测

3．15 细胞克隆实验

3．16 免疫组化检测TPD52L2在肺癌及癌旁组织中的表达

3．17 统计学分析

4 实验结果

4．1 TPD52L2在人肺腺癌组织及癌旁组织的表达

4．2 慢病毒感染效率检测

4．2 shRNA慢病毒对A549细胞TPD52L2 mRNA表达的影响

4．3 shRNA慢病毒对A549细胞TPD52L2蛋白表达影响

4．4 MTT检测细胞增殖能力的变化

4．5 细胞克隆实验

4．6 FCM检测细胞周期改变

5 讨论

6 总结

参考文献

综述 非小细胞肺癌分子靶向治疗相关靶点研究进展

作者简历