黄芩提取物对NMDA受体介导大鼠兴奋性毒性神经细胞死亡的保护作用

摘要

目的:
　　(1)探讨黄芩乙醇提取物对大鼠原代皮质神经元细胞培养物中兴奋性毒性神经细胞死亡的保护作用及其可能的分子机制;(2)采用LC-ESI-MS-MS/HPLC分析技术，对黄芩提取物的植物化学成分进行分析。
　　方法:
　　(1)采用溶剂为95％乙醇、时间为4h的索氏提取法，并在40℃下运用旋转蒸发仪提取浓缩得到黄芩乙醇提取物;(2)进行原代大鼠皮层神经元细胞的分离培养，用NMDA和Glu诱导神经细胞产生兴奋性毒性，倒置相差显微镜下观察原代神经元的细胞形态，并用LDH的释放量评价黄芩乙醇提取物的神经保护作用;(3)进行突触膜受体结合研究，采用[3H] MDL105，519结合实验和[3H] MK-801结合实验初步探讨黄芩乙醇提取物对NMDA潜在的抑制作用;(4)采用LC-ESI-MS-MS/HPLC分析技术对黄芩乙醇提取物的活性化学成分进行定性定量初步分析。
　　结果:
　　(1)倒置相差显微镜下观察原代培养的皮层神经元细胞，正常对照组中，细胞具备神经元的典型形态特征:轴突、树突生长较好，连接成网状，细胞核膜清晰;而Glu处理组表现出树突细胞破裂，核轮廓模糊及细胞肿胀等特征;100 mg/mL的黄芩乙醇提取物能够改善神经元细胞的损伤情况，表现出规律的和清晰的轴突和树突;(2) LDH活性的测定实验表明，黄芩乙醇提取物对LDH的释放呈剂量依赖性的抑制作用，在100μg/ml的浓度时，几乎90-95％的神经元免受兴奋性毒性的伤害，其中在Glu和NMDA诱导神经兴奋性损伤实验中的IC50值分别是60.01，28.60μg/ml;(3)[3H] MDL105，519特异性结合实验表明，黄芩乙醇提取物的浓度达到100μg/ml时，超过90％的[3H] MDL105，519的结合被提取物置换，其中IC50值为35.1μg/ml;[3H] MK-801特异性结合实验表明黄芩乙醇提取物的浓度在100μg/ml的浓度，大约80％的[3H] MK-801的结合被提取物置换，其中IC50值是65.1μg/ml;(4)通过LC-ESI-MS-MS/HPLC分析技术检测，对黄芩乙醇提取物的植物化学成分进行分析，确定了6个化学成分，分别为:汉黄芩素，黄芩素，黄芩苷，汉黄芩苷，野黄芩苷和千层纸素A，在黄芩乙醇提取物中其含量分别0.316％，0.182％，0.089％，0.112％，0.092％，0.105％，其中汉黄芩素是含量最大的成分。
　　结论:
　　(1)黄芩乙醇提取物对Glu或NMDA诱导的兴奋的神经保护作用是通过NMDA受体的阻断介导的，因此该提取物可以作为NMDA受体拮抗剂，有潜在的治疗多种神经系统性疾病的应用价值;(2)黄芩乙醇提取物的主要活性成分有汉黄芩素，黄芩素，黄芩苷，汉黄芩苷，野黄芩苷和千层纸素A，其中汉黄芩素含量最高，这为该天然产物的深入研究和开发提供了实验依据。

目录

声明

致谢

摘要

缩略词表

前言

材料和方法

1．材料

2．实验方法

3．结果

3．1 黄芩乙醇提取物对大鼠原代皮层神经元的细胞形态影响

3．2．黄芩乙醇提取物对大鼠原代皮层神经元细胞LDH释放的影响

3．3．黄芩提取物对LPS诱导的小胶质细胞活化的的抗炎效应

3．4．黄芩提取物对线粒体损伤的保护作用

3．5．黄芩提取物对大鼠LPS诱导的抑郁样行为的作用

3．6．突触膜结合实验研究

3．7．LC-ESI-MS-MS／HPLC分析技术检测实验

4．讨论

结论

参考文献

综述 中枢神经系统损伤机制及中药干预研究进展

作者简介