番茄灰霉病拮抗菌筛选及复合生物海藻液肥研制

摘要

番茄灰霉病菌是由半知菌亚门灰葡萄孢属（Botrytis cinerea）真菌侵染所引起对番茄危害较重的病害，影响果实产量和品质。筛选灰霉病拮抗菌并制备生物菌肥是生物防治植物病害的重要途径。目前，对生物菌肥的研究大多数针对一种拮抗菌，单一菌株的防病效果较复合菌株低，防治效果不理想。鉴此，本研究从宁波番茄保护地健康植株根际土壤筛选出两株对番茄灰霉病菌有高效抑制作用的菌株LM-Y和LM-N，对其进行鉴定，研究复合菌株对番茄灰霉病的抑菌特性及适宜发酵条件，以海藻液为载体制备复合生物海藻肥，通过室内盆栽试验来初步探究海藻菌肥的防病和促生长效果，为生产复合微生物肥料提供依据。主要研究结果如下:
　　1、番茄灰霉病拮抗菌的分离鉴定。采用稀释涂布及平板划线法分离纯化菌株，平板对峙法初筛得到24株对番茄灰霉病菌具有拮抗作用的生防菌。以水稻赤霉病菌和油菜立枯丝核菌为指示菌，复筛选取对两种病原菌均有拮抗作用的菌株最终得到2株高效抑制番茄灰霉病菌的菌株，分别命名为LM-Y和LM-N。结合形态特征、生理生化分析和16s rDNA序列构建系统发育树，鉴定LM-Y为解淀粉芽孢杆菌，LM-N为甲基营养型芽孢杆菌。
　　2、拮抗菌株液体发酵条件优化。拮抗试验表明菌株LM-Y和LM-N具有亲和性，可以混合发酵。复合菌株摇床发酵培养的最适发酵条件为:初始pH7.0，接种量5％，装液量90mL(250mL三角瓶)，发酵时间48h，摇床温度29℃，转速180r·min-1，最佳接种比例为LM-Y∶LM-N=1∶2，培养所得发酵液对番茄灰霉菌的抑菌直径较单菌株分别提高了了44.31％和32.47％。
　　3、复合生物海藻菌肥的制备及防病增产效果评价。不同浓度复合生物海藻菌肥处理番茄种子可增加种子的发芽率和发芽势，其中400倍液处理效果最佳。盆栽试验定期统计番茄灰霉病的发病情况和测定番茄根际土壤中病原菌数量变化，测定番茄的株高、茎粗及收获后的单果重。结果表明，施用复合生物海藻液肥（处理5）和复合菌株发酵液（处理3）可抑制灰霉病病原菌繁殖，病情指数比只接种病原菌（处理2）分别降低70.41％和38.86％;处理5较单一的海藻液（处理4）番茄株高、茎粗和单果重有所增加，表明复合生物海藻液肥兼具促生和防病效果。

目录

声明

致谢

摘要

第一章 绪论

1．1 番茄灰霉病研究概况

1．1．1 番茄灰霉病的发生及危害

1．1．2 番茄灰霉病的防治对策

1．2 植物灰霉病的生物防治

1．2．1 生防菌在植物灰霉病生物防治中的应用

1．2．2 芽孢杆菌在植物病害生物防治中的应用

1．3 生物菌肥研究现状

1．3．1 生物菌肥的概念、特点

1．3．2 生物菌肥的主要作用

1．3．3 生物菌肥应用研究与发展前景

1．3．4 海藻生物肥研究进展

1．4 研究内容及意义

1．5 技术路线

第二章 解淀粉芽孢杆菌的分离鉴定

2．1 引言

2．2 材料与方法

2．2．1 试验材料

2．2．2 番茄灰霉病拮抗菌的分离

2．2．3 拮抗菌的筛选

2．2．4 菌种保存

2．2．5 番茄灰霉病拮抗菌的鉴定

2．3 结果与分析

2．3．1 拮抗菌的筛选

2．3．2 菌株LM-Y的鉴定

2．4 本章小结

第三章 甲基营养型芽孢杆菌的分离鉴定

3．1 引言

3．2 材料与方法

3．3 结果与分析

3．3．1 拮抗菌筛选

3．3．2 菌株LM-N的鉴定

3．4 本章小结

第四章 复合菌株混合培养及抑菌活性研究

4．1 引言

4．2 材料与方法

4．2．1 供试材料

4．2．2 单菌株种子液及无菌滤液制备

4．2．3 复合菌株拮抗试验

4．2．4 复合菌株最佳混配比例筛选

4．2．5 不同培养条件对复合菌株生长量和抑菌活性的影响

4．2．6 培养条件优化后抑菌活性对比

4．3 数据统计分析方法

4．4 结果与讨论

4．4．1 复合菌株拮抗试验

4．4．2 复合菌株混配比例筛选

4．4．3 不同碳源对复合菌株生长量和抑菌活性的影响

4．4．4 不同氮源对复合菌株生长量和抑菌活性的影响

4．4．5 不同无机盐对复合菌株生长量和抑菌活性的影响

4．4．6 初始pH对复合菌株生长量和抑菌活性的影响

4．4．7 接种量对复合菌株生长量和抑菌活性的影响

4．4．8 装液量对复合菌株生长量和抑菌活性的影响

4．4．9 发酵时间对复合菌株生长量和抑菌活性的影响

4．4．10 温度对复合菌株生长量和抑菌活性的影响

4．4．11 培养条件优化后抑菌活性对比

4．5 本章小结

第五章 复合生物海藻液肥对盆栽番茄抗病增产效果初探

5．1 引言

5．2 材料与方法

5．2．1 供试材料

5．2．2 试验方案

5．3 数据统计分析

5．4 结果与讨论

5．4．1 复合生物海藻液肥对番茄种子萌发影响

5．4．2 不同处理对番茄灰霉病病情指数影响

5．4．3 不同处理对土壤中灰霉病菌数量影响

5．4．4 不同处理对番茄生物量影响

5．5 本章小结

第六章 总结与展望

6．1 主要结论

6．2 展望

参考文献

作者简介