烧伤及内毒素作用对结肠袋平滑肌细胞线粒体膜电位及细胞凋亡的改变

摘要

目的：严重烧伤后，病人会发生严重的肠道功能紊乱，对于其机制目前的研究主要是集中于肠道黏膜的上皮细胞改变上，但是作为肠道动力的平滑肌细胞的研究仍然比较少，本实验意在检测其线粒体膜电位的改变研究其供能能力的改变，并研究在烧伤状态下平滑肌细胞是否发生凋亡。在烧伤后全身会发生严重的内毒素血症，那么内毒素在烧伤后的肠道动力紊乱中所起的作用也是我们本次实验研究的目的之一。方法：（1）以豚鼠分三组，一组制作30％烫伤模型，一组制作内毒素模型，最后一组作为对照组，腹腔注射生理盐水。（2）取受实验动物的结肠袋组织，去黏膜和浆膜，留其平滑肌组织。（3）以酶消化（1g/L胶原酶）加机械分离法制作单细胞悬液，在倒置相差显微镜下观察细胞的形态。（4）收集所分离的单细胞悬液，滴加D—Hanks平衡液调节细胞数为1×10 6/L。每份样品分为5部分，分别做线粒体膜电位测定和凋亡系列检测。检测仪器为美国Beckman公司流式细胞仪。结果：实验中发现，烫伤组和内毒素注射组检测可发现其线粒体膜电位均较正常对照组明显下降，但两者之间无显著性差别。在凋亡检测方面，可见正常肠道平滑肌细胞即可见凋亡存在，但在烫伤和内毒素注射时，凋亡率显著增加，有显著的差异，而烫伤组和内毒素注射组之间也有显著的差异，烫伤组明显要高于内毒素注射组。结论：1：在严重烧烫伤时，肠道平滑肌细胞的能量来源受到抑制，主要是线粒体膜电位发生了改变，导致线粒体膜通透性发生变化，进而引起能量供应的低下。其主要的因素是烧伤时产生的内毒素的作用所引起的。2：严重烧烫伤时肠道平滑肌细胞的凋亡率明显升高，内毒素是其升高的一个重要因素，但不是其唯一因素。可能仍有其他未证明的物质参与其凋亡变化。3：对于肠道平滑肌的凋亡，线粒体膜电位改变和其凋亡率的升高有密切的相关性。