缺血预处理对肝缺血再灌注损伤肝细胞钙影响的实验研究

摘要

目的：通过肝缺血预处理，利用激光扫描共聚焦显微技术观测肝细胞内Ca2+变化，为缺血预处理对肝缺血再灌注损伤的保护机制补充理论依据。 方法：成年健康雄性豚鼠24只，体重300～350g,以体重为标准，按随机表配对分成3组：对照组(A组)，缺血预处理组(B组)和缺血再灌注组(C组)，每组8只。模拟Pringle法。常温下阻断肝门，45min后恢复血流，对肝脏持续再灌注，造全肝热缺血再灌注模型。A组干扰腹腔125min后取标本；B组缺血5min再灌注5min二次作预处理，缺血45min再灌注60min后取标本；C组缺血45min再灌注60min后取标本。观察动物活体肝脏；右肝组织标本常规HE染色，光镜下观察；测腔静脉血丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天门冬氨酸氨基转移酶(AST)；组织标本荧光试剂Fluo-3/AM负载，激光扫描共聚焦显微镜观测肝细胞内钙离子荧光强度及其分布。 结果：观察动物活体肝脏：所有动物肝脏缺血前均红润光亮质软，均匀一致。A组干预前后肝脏质地无明显差异；B组干预后见肝脏稍变暗，稍肿胀；C组干预后见肝脏明显变暗，明显肿胀。低倍镜下观察：A组见肝索完整，肝细胞排列有序无水肿变性，肝窦无扩张、淤血，无炎细胞浸润等；B组见肝索基本完整，肝细胞排列有序，稍水肿，肝窦稍扩张，未见炎细胞浸润；C组见肝索不完整，肝细胞排列紊乱，水肿变性，肝窦扩张，炎细胞浸润。高倍镜下观察：A组见肝细胞形态正常；C组见肝细胞肿胀，空泡变性及点状坏死；B组见散在肝细胞肿胀变性，其程度和范围明显轻于缺血再灌注组。ALT含量A组低于C组二者差异有显著性(p＜0.01)；B组低于C组二者差异有显著性(p＜0.05)；AST含量A组低于C组二者差异有显著性(p＜0.05)；B组低于C组二者差异有显著性(p＜0.05)；激光扫描共聚焦显微镜下观察：荧光强度代表肝细胞内游离钙离子浓度，荧光强度越强则浓度越高，反之则越低。标本细胞内游离钙离子荧光强度(OD值)A组低于C组二者有显著性差异(p＜0.05)；B组低于C组二者有显著性差异(p＜0.05)。三组图片比较发现：缺血再灌注组图片荧光强度最强，缺血预处理组次之，对照组最弱.肝细胞内荧光强度分布的观察：Fluo-3与游离Ca2+结合后，在激光束激发下发出黄绿色荧光，荧光不均匀地分布于胞浆中，不同区域荧光强度不同，呈网状或团块状。 结论：肝缺血再灌注引起肝细胞损伤；肝缺血预处理能够减轻肝缺血再灌注引起的肝细胞损伤；肝缺血预处理能够降低肝细胞钙超载，肝细胞钙超载降低是肝缺血预处理减轻肝缺血再灌注损伤的机制之一。

目录

摘要

前言

材料和方法

结果

讨论

结论

附

参考文献

英汉缩略名词对照表

致谢

综述 钙离子与肝脏疾病

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