冠心病与风险基因ABCG1、GALNT2、HMGCR启动子区甲基化关系的研究

摘要

研究背景和目的：DNA甲基化是目前研究比较成熟和可靠的表观遗传学调控机制。大量研究表明 DNA异常甲基化可能是引起或影响人类疾病如肿瘤和动脉粥样硬化的重要原因。GWAS（Genome wide association study）证实了 ABCG1，GALNT2和HMGCR基因与冠心病（coronary heart disease，CHD）和血脂代谢异常有关。本研究首次检测CHD患者ABCG1，GALNT2和HMGCR基因启动子区是否存在DNA甲基化状态的改变；其次，分析中国汉族人群 ABCG1，GALNT2和 HMGCR基因启动子区甲基化状态与临床特征之间的相关性，最后分析 ABCG1、GALNT2和 HMGCR基因启动子区异常甲基化是否与CHD的患病风险相关。
　　方法和结果：采用甲基化特异性 PCR（Methylation-specific polymerase chain reaction，MSP）技术检测中国汉族人群 ABCG1，GALNT2和 HMGCR基因启动子区甲基化状态。根据冠脉造影结果选取85例 CHD患者作为实验组，54例冠脉完全正常的作为对照组。研究发现，ABCG1基因启动子区 DNA甲基化阳性率在 CHD组中为90.5％，而在正常对照组中为29.6%。GALNT2基因启动子区甲基化阳性率在 CHD组与对照组比较也表现出较高的平均水平（54.1% vs27.8%）。HMGCR基因启动子区甲基化阳性率在 CHD患者中为34.1%，而在正常对照组中为22.2%.本研究结果发现ABCG1基因的启动子区高甲基化可能与CHD的患病风险有关（OR=19.966;95% CI,7.319-54.468; P*<0.001）；GALNT2基因启动子区甲基化阳性率CHD组与正常组差异有统计学意义（OR=2.978;95%CI,1.335-6.646; P*=0.008），GALNT2基因启动子区高甲基化可能也与CHD相关；但HMGCR基因启动子区甲基化冠心病组与正常组差异无统计学意义(OR=1.388;95%CI,0.572-3.371;P*=0.469）。此外，本研究发现ABCG1基因启动子区甲基化人群中糖尿病患病率为26.9%和未甲基化人群为6.5%；甲基化人群中CHD患病率82.8%和未甲基化人群为17.4%。GALNT2基因启动子区甲基化人群年龄为62.10±8.21岁和未甲基化人群为57.28±9.87岁；甲基化人群中CHD患病率75.4%和未甲基化人群为50%。HMGCR基因启动子区甲基化人群年龄为63.24±8.10岁和未甲基化人群为57.79±9.55岁；HMGCR基因启动子区甲基化可能与吸烟相关。
　　结论：本研究结果说明ABCG1和GALNT2基因的启动子区高甲基化可能增加CHD的患病风险。未发现HMGCR基因的启动子区甲基化与CHD患病风险相关。CHD、年龄和吸烟可能是影响DNA甲基化的重要因素。

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引言

1研究对象的选择

2 全血中基因组DNA的提取

2.1实验仪器

2.2实验材料与试剂

2.3实验步骤与方法

3 亚硫酸氢盐修饰基因组DNA和基因组DNA纯化回收

3.1实验仪器

3.2实验材料与试剂

3.3实验步骤与方法

4 甲基化特异性PCR和琼脂糖凝胶电泳判定甲基化结果

4.1 实验仪器

4.2 实验材料与试剂

4.3实验步骤

5统计分析与实验结果

5.1统计分析

5.2 实验结果

6 讨论

7 结论

参考文献

附录A 中英文缩略词表

附录B 综述

在学研究成果

致谢