雷公藤内酯醇对大鼠佐剂性关节炎镇痛作用的脊髓神经生物学机制

摘要

【目的】：观察不同剂量雷公藤内酯醇(triptolide,TP)对佐剂性关节炎(adjuvant arthritis, AA)大鼠的镇痛效应，及相应节段脊髓背角和背根神经节(dorsal root gangli,DRG)中诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)、P物质(substance P,SP)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(tumour necrosis factor-α,TNF-α)、西非单叶豆同工凝集素(Bandeirae Simplicifolia Isolectin-B4,BSI-B4)结合位点和NMDA受体亚型R1(N-methyl-D-aspartate receptorsubtype R1,NMDAR1)表达变化的影响，探讨TP对RA镇痛作用的可能机制。
　　【方法】：选用SD大鼠50只，随机分成正常组(A组)、模型组(B组)、TP低(C组)、中(D组)、高(E组)剂量治疗组。除A组外，每组大鼠右后趾皮内注入0.1ml弗氏完全佐剂造模。造模后14d，C、D、E组大鼠采取不同剂量(C组0.1mg/kg,D组0.2mg/kg,E组0.4mg/kg)TP腹腔注射给药，每天一次，连续给药9d之后检测50％机械痛阈(mechanical withdrawthreshold, MWT)、热痛阈、足跖肿胀度(Edema Rate,ER%)，用免疫组织化学的方法检测腰5(L5)脊髓背角和 DRG节段中 iNOS、SP、IL-1β、TNF-α、BSI-B4结合位点、NMDAR1的蛋白表达变化情况，iNOSmRNA、SPmRNA、IL-1βmRNA、TNF-αmRNA的表达变化同时进行RT-PCR检测。
　　【结果】：B组大鼠50%MWT、热痛阈显著低于 A组(P<0.01)，经过 TP治疗后，C、D、E组50%MWT、热痛阈显著高于 B组(P<0.01)，TP可显著提高 AA大鼠50%MWT、热痛阈；B组大鼠足跖ER%显著高于A组(P<0.01)，C、D、E组ER%显著低于B组(P<0.01)，TP可显著降低AA大鼠足跖ER%；免疫组化结果表明：与A组比较，B组 iNOS、SP、IL-1β、TNF-α、NMDAR1、BSI-B4结合位点阳性表达水平显著升高(P<0.01)，而 C、D、E组大鼠 L5节段脊髓背角和 DRG中 iNOS、SP、IL-1β、TNF-α、NMDAR1、BSI-B4结合位点阳性表达水平显著低于B组(P<0.01)，呈一定的量效关系;RT-PCR结果显示：B组大鼠 NOSmRNA、SPmRNA、IL-1βmRNA、TNF-αmRNA水平显著高于A组(P<0.01)，C、D、E组大鼠iNOSmRNA、SPmRNA、IL-1βmRNA水平显著低于B组(P<0.01)，C组TNF-αmRNA水平与B组无显著差异，D、E组大鼠TNF-αmRNA水平显著低于B组(P<0.01)。
　　【结论】：TP对AA具有良好抗炎镇痛作用；TP可抑制AA大鼠脊髓背角和DRG中iNOS、SP、IL-1β、TNF-α、NMDAR1、BSI-B4结合位点的表达，这可能是TP产生镇痛作用机制之一。

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引言

1实验材料

1.1实验动物和药品

1.2主要材料与试剂

1.3主要仪器：

2实验方法

2.1实验动物分组

2.2佐剂性关节炎模型制备

2.3给药方法

2.4足趾肿胀度检测

2.5热痛阈测定

2.6 50%机械痛阈测定

2.7实验动物处死与材料获取

2 .8软骨组织固定、包埋和HE染色

2.9脊髓与DRG免疫组织化学染色

2.10 RT-PCR检测L5脊髓iNOS、SP、IL-1β、TNF-α的mRNA水平

2.11统计学分析

3实验结果

3.1 TP对AA大鼠足跖肿胀度的影响

3.2 TP对AA大鼠踝关节滑模组织病理学影响

3.3 TP对AA大鼠MWT%、热痛阈的影响

3.4免疫组化法检测TP对AA大鼠脊髓和背根神经节中iNOS、SP、IL-1β、TNF-α、NMDAR1、BSI-B4结合位点表达的影响

3.5 RT-PCR法检测TP对AA大鼠脊髓中iNOS、SP、TNF-α、IL-1β的mRN A表达的影响

4讨论

参考文献

附录A 缩略词

附录B 综述

在学研究成果

致谢