雌激素对大鼠急性缺血后肢血管新生影响的研究

摘要

目的：研究雌激素在肢体缺血代偿过程中，对VEGF表达及骨骼肌微血管密度（MVD）的影响，探讨雌激素影响缺血肢体病理生理变化的作用机制。方法：SD雄性大鼠120只，随机选24只大鼠作为对照组，其余96只大鼠随机分为两实验组，每组48只，一组为后肢缺血组（简称I组）,行右后肢单侧股动脉结扎切除术；另一组为后肢缺血+雌激素组（简称I+E组）,手术方式与I组相同，并于手术当天开始皮下注射17β-雌二醇(30μg/kg·d)至实验结束。各组分别于术后1天、3天、7天、14天、28天及56天取材，每次8只大鼠，获取大鼠右后肢骨骼肌固定及石蜡包埋，免疫组织化学染色检测骨骼肌VEGF蛋白表达及CD34表达，同时抽血ELISA法测定血清VEGF数值。对照组大鼠仅作右后肢皮肤切开和缝合，与实验组动物在同一时相点取材，每次4只大鼠。结果：1. 免疫组化染色骨骼肌VEGF蛋白表达检测结果：对照组大鼠各时相点骨骼肌VEGF蛋白表达呈阴性或极弱阳性。两实验组第一天骨骼肌内未发现VEGF阳性表达，阳性系数为0；第三天均发现VEGF蛋白阳性表达，其表达强度在第7天达到高峰（I组：3.25±0.46；I+E组：3.75±0.64），以后呈下降趋势，在56天明显减弱（I组：0.88±0.64；I+E组：1.75±0.71）。I+E组VEGF蛋白表达较高，与I组比较在各时相点（第1天除外）均有显著增高（P<0.05）。2. 血清VEGF检测结果：对照组大鼠各时相点血清VEGF数值波动不大（57.58±2.78pg/ml）。两实验组第一天大鼠血清VEGF数值即升高(I组：63.63±5.45 pg/ml；I+E组：74.5±5.37pg/ml)，其中I+E组与对照组比较有显著差异（P<0.01）；于7天达到高峰（I组：139.13±5.22 pg/ml；I+E组：159.75±4.33pg/ml），以后缓慢回落。I+E组与I组比较，在各时相点血清VEGF数值均显著升高（P<0.01）。3. 骨骼肌微血管密度（MVD）检测结果：以CD34染色阳性的血管数作为骨骼肌微血管密度（MVD）。对照组大鼠各时相点骨骼肌MVD变化不大(14.58±1.99)。两实验组第一天骨骼肌MVD明显降低（I组：9.75±2.05；I+E组：11.88±2.17），与对照组比较有显著差异（P<0.05）；以后MVD持续增高，在14天达峰值（I组：30.25±1.98；I+E组：40.50±2.20），然后逐渐下降，但仍维持在一定水平。在各时相点（第1天除外），I+E组MVD均较I组显著升高（P<0.05）。4. VEGF表达与MVD之间的关系：直线相关分析结果表明，I组和I+E组内两种VEGF表达结果与相应组MVD之间均具有显著相关性（P<0.01）。结论：1. 肢体缺血后VEGF表达增强，于7天达高峰，但其表达有一定时限性；MVD也呈动态变化，在14天达高峰，与VEGF表达之间有一个时间差。两实验组内VEGF表达与MVD之间均有显著相关性，提示VEGF具有促血管生成作用。2. 在缺血早期，肢体因VEGF表达增强而具有一定的代偿能力，缺血缺氧是造成肢体VEGF表达增强的主要因素。3. 雌激素能够增强肢体缺血时VEGF表达，进而提高骨骼肌微血管密度，使缺血肢体的代偿能力提高。