脂肪间充质干细胞复合人工真皮（皮耐克）修复深度烧伤的研究

摘要

目的：
　　探讨脂肪间充质干细胞复合人工真皮（皮耐克）对深度烧伤愈合的影响及机制的研究。
　　方法：
　　选用 SPF级绿色荧光蛋白转基因大鼠，取其腹股沟处脂肪垫，胶原酶消化法获取脂肪间充质干细胞（Adipose-Derived Mesenchymal Stem Cells，ADSCs），流式分析细胞表面特异性标志物，并诱导其向成脂细胞、成骨细胞等方向分化，观察 ADSCs的多向分化能力。将制备成功的大鼠（成年雌性实验级 SD大鼠）深度烧伤模型为两组：A组：人工真皮（皮耐克）+ADSCs组；B组：人工真皮（皮耐克）+生理盐水组。术后每天观察创面有无感染、异常分泌物等情况，并每周记录创面最大直径以评估创面愈合情况。术后3周取创面皮肤组织进行冰冻切片，评估 ADSCs参与创面愈合情况，HE切片观察创面皮肤组织中肉芽组织增生和上皮化过程。
　　结果：
　　1.实现了大鼠 ADSCs的成功分离、培养、纯化及鉴定，3代-10代内基本按对数生长，形态均一，具备典型的间充质干细胞的形态学特征。流式检测结果显示 ADSCs高表达间充质标记物 CD29、CD90、CD105；低表达造血系细胞表面标记物 CD34及血管内皮性抗原 CD45。
　　2.皮肤深度烧伤模型显示：与对照组相比，在1周、2周和3周的时间里ADSCs-皮耐克复合真皮治疗组（A组）创面最大直径明显小于对照组（B组）创面，并且在实验组，创面愈合后的皮肤附属结构恢复情况好于对照组创面。HE染色显示，A组、B组均与正常皮肤结构形态相似，但 A组形态更为接近正常皮肤结构。荧光显微镜下，移植了 ADSCs的A组创面组织可见位于散落点状荧光。
　　结论：
　　1.人工真皮（皮耐克）具有很好的吸附性、亲和性和保湿性，且生物来源广泛、价格低廉、安全无毒，是一种极佳的可应用于创面修复的生物工程材料。2. ADSCs免疫原性低，移植于大鼠深度烧伤创面后一定时期内仍可在组织内存活而不被排斥，保证了移植后持续发挥作用。同时，人工真皮（皮耐克）可在创面上形成一层支架，起到了保护创面且防止移植的ADSCs流失的作用。ADSCs联合人工真皮（皮耐克）作用于创面后能加速创面愈合，是一种非常有效的治疗深度烧伤创面的方法。

目录

声明

引言

1材料与方法

1.1实验设计

1.2实验材料

1.2.1实验对象

1.2.2主要实验材料与试剂

1.2.3主要实验设备与仪器

1.3实验方法

1.3.1大鼠ADSCs的分离、培养

1.3.2 大鼠 ADSCs的细胞流式表型鉴定

1.3.3 ADSCs向成骨细胞、成脂细胞诱导分化及鉴定

1.3.4大鼠皮肤深度烧伤模型的建立

1.3.5大鼠深度烧伤治疗模型分组

1.3.6大鼠创面皮肤取材及处理

1.3.7组织学观察

1.4统计学分析

2结果

2.1 ADSCs的分离与培养

2.2 ADSCs的鉴定

2.3 ADSCs多向分化能力鉴定

2.4创面愈合情况

2.5病理学改变

2.5.1冰冻切片

2.5.2 HE染色

3讨论

4结论

参考文献

附录A 综述：间充质干细胞在创面愈合中的作用研究进展

在学研究成果

致谢