不同时间点雾化吸入STAT1反义寡核苷酸对肺纤维化大鼠的影响

摘要

目的： 观察博莱霉素（bleomycin，BLM）致肺纤维化大鼠不同时间点雾化吸入信号转导子和转录活化子1（signal transducer and activator of transcription 1，STAT1）反义寡核苷酸（antisense oligonucleotides，ASON）对支气管肺泡灌洗液（BALF）中的细胞因子：血小板源性生长因子（PDGF）、肿瘤坏死因子（TNF-α）、转化生长因子β1（TGF-β1）及肺组织Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达的影响，探讨最佳给药时机。 方法： 成年Wistar雌性大鼠25只随机平均分为BLM组、ASON 0 d组、ASON 7 d组、ASON14 d组和生理盐水（NS）组，前4组气管内灌注BLM建立肺纤维化模型，NS组气管内灌注NS。ASON 0、7、14 d组分别于气管内灌注BLM后立即、第7和14天开始雾化吸入STAT1 ASON；NS组和BLM组雾化吸入NS。气管内灌注BLM后第28天处死各组大鼠，取肺组织分别行HE和Masson染色，观察肺泡炎和纤维化情况并评分；酶联免疫吸附试验（ELISA）测定BALF中PDGF、TNF-α与TGF-β1的浓度；逆转录-聚合酶链反应（Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction，RT-PCR）测定肺组织Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达。 结果： （1）肺组织病理学观察显示：NS组动物大鼠未发现肺泡间隔水肿、炎性细胞浸润和纤维化形成。BLM组大鼠肺泡结构破坏、间质增生，形成广泛纤维化，同时存在肺泡炎。ASON 0 d组大鼠肺泡结构尚存，可见炎性细胞浸润和胶原纤维增生，但肺泡炎及肺纤维化程度明显轻于BLM组和ASON 14 d组；肺泡炎评分（1.80±0.84）和肺纤维化评分（2.60±0.55）均明显低于BLM组（2.40±0.55、4.40±0.55）、ASON7 d组（2.20±0.45、3.00±0.71）和ASON 14 d组（2.20±0.84、4.00±1.00，均P<0.05）。ASON 7 d组大鼠肺泡结构尚存，可见炎性细胞浸润和胶原纤维增生，其肺泡炎程度与BLM组类似，而肺纤维化程度轻于BLM组和ASON 14 d组；肺纤维化评分也明显低于BLM组和ASON 14 d组（均P<0.05）。ASON 14 d组大鼠肺泡结构破坏，肺泡腔融合，其肺泡炎和肺纤维化程度均与BLM组类似。 （2）ASON 0 d组BALF中PDGF、TGF-β1与TNF-α浓度[（42.52±4.37）pg/ml、（48.11±3.46）pg/ml、（1.93±0.14）ng/ml]均明显低于BLM组[（56.26±6.85）pg/ml、（57.67±2.46）pg/ml、（2.45±0.25）ng/ml，均P<0.05]，TGF-β1浓度明显低于ASON 7 d组[（51.42±3.57）pg/ml]和ASON 14 d组[（55.83±1.79）pg/ml，均P<0.05]；ASON 7 d组BALF中TGF-β1浓度[（51.42±3.57）pg/ml]也明显低于BLM组和ASON 14 d组（均P<0.05）；ASON 14 d组BALF中PDGF浓度[（45.85±2.08）pg/ml]明显低于BLM组（P<0.05）。 （3）ASON 0 d组Ⅰ型和Ⅲ型胶原mRNA的相对表达量（1.23±0.11、0.71±0.05）明显低于BLM组和ASON 14 d组[（1.95±0.42、1.25±0.12）、（1.91±0.20、1.12±0.21），均P<0.05]。 结论： 早期雾化吸入STAT1ASON对BLM致肺纤维化大鼠的肺纤维化形成有明显阻抑作用，用药越早效果越好，提示雾化吸入STAT1 ASON有可能成为肺纤维化的早期干预手段。

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核因子-kappa B与肺纤维化关系的研究进展 综述

发表论文 博来霉素致肺纤维化大鼠不同时间点吸入STAT1反义寡核苷酸的疗效比较