拓扑异构酶Ⅰ抑制剂对CNE-2细胞株放射增敏的体外比较实验研究

摘要

目的：应用细胞克隆形成法，初步比较拓扑异构酶Ⅰ抑制剂拓扑替康、伊立替康、羟喜树碱对人鼻咽癌低分化细胞株CNE2的放射增敏作用。 方法：培养鼻咽癌低分化细胞株CNE2。将指数生长期的细胞按1×104个/孔接种到96孔板，用WST法进行拓扑替康、伊立替康、羟喜树碱的细胞毒性检测，得出IC50、IC10。将IC10作为放射增敏的工作浓度。待细胞生长至指数生长期，进行细胞收集、重悬、计数，并按射线照射剂量梯度，在培养皿中加入不同细胞总数的细胞悬液。实验分为正常对照组、单纯照射组、单纯药物组、药物+照射组，其中药物+照射组分为三个亚组：拓扑替康+照射组、伊立替康+照射组、羟喜树碱+照射组。在照射前30分钟分别加入工作浓度的拓扑替康、伊立替康、羟喜树碱，后按不同的照射剂量梯度照射。采用医用直线加速器，照射条件为6 MV X线照射，剂量率为：418.41cGy/min，SSD为100cm，PDD为99.4％，照射野大小为25×25cm。照射后4小时，更换培养基，在37℃、0.5％CO2恒温孵育箱中培养14天，应用计数克隆形成方法，计算细胞存活率，用单击多靶数学模型，使用GraphPadPrism5.0软件进行曲线拟合作图。通过计算N、D0、Dq、SERD0、SERDq、SERSF2，比较单纯照射组和药物+照射组之间，以及各个药物+照射亚组之间的放射增敏作用的强弱。 结果：拓扑替康、伊立替康、羟喜树碱对CNE2细胞的IC50分别为0.28ug/ml、1.43ug/ml、18.78ug/ml；IC10分别为0.08ug/ml、0.56ug/ml、0.68ug/ml。CNE2细胞的克隆形成率为68％。单纯照射组的N值为3.728，D0值为1．187Gy，Dq值为0.678 Gy；拓扑替康+照射组的N值为5.219，D0值为0.560 Gy，Dq值为0.402Gy，SERD0、SERDq、SERSF2分别为2.120、1.687、5.255；伊立替康+照射组的N值为2.906，D0值0.911Gy，Dq值为0.422Gy，SERD0、SERDqSERSF2分别为1.303、1.607、2.00；羟喜树碱+照射组的N值为3.499，D0值为0.746Gy，Dq值为0.406Gy，SERD0、SERDq、SERSF2分别为1.591、1.670、3.012。 结论：研究结果显示，拓扑替康、伊立替康、羟喜树碱在IC10低浓度下对CNE2细胞株均具有放射增敏作用。放射增敏作用强弱依次为拓扑替康最强，羟喜树碱次之，伊立替康最弱。

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拓扑异构酶Ⅰ抑制剂肿瘤放射增敏作用的研究进展(综述)