阿魏酸钠对单侧输尿管梗阻大鼠肾脏保护作用的研究

摘要

目的：通过建立单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠肾间质纤维化模型，并给予阿魏酸钠进行干预治疗，观察肾间质纤维化时Ⅰ型胶原(Col Ⅰ)、Ⅲ型胶原(Col Ⅲ)、组织型纤溶酶原激活物(t-PA)、尿激酶型纤溶酶原激活物(u-PA)及纤溶酶原激活物抑制剂-1(PAI-1)的动态表达情况，以及阿魏酸钠对肾间质纤维化的防治作用和对上述相关指标的影响，为临床肾间质纤维化的防治探索新的方法并提供实验性理论依据。 方法：实验采用UUO制造肾间质纤维化模型，将96只雄性SD大鼠随机分为正常组、假手术组、UUO组及阿魏酸钠治疗组共4组，每组24只，每组分别在实验第1、4、7、14天设立观察点，每个观察点6只。在实验各观察点分别处死实验动物，取血检测血肌酐、尿素氮的浓度；运用病理技术，光镜400倍下观察HE染色切片肾间质纤维化面积及肾小管损伤情况；运用免疫组织化学技术半定量分析各组动物标本Col Ⅰ、Col Ⅲ、u-PA、t-PA及PAI-1的表达情况。对肾小管损害程度采用百分比评分法进行评估，计算20个高倍视野(×400)中受损肾小管的数目及肾小管总数，以受损的肾小管数目占总肾小管数目的百分比表示其受损程度。肾间质纤维化程度采用评分法进行评判，其标准为：0分：间质面积与视野总面积之比<5％；1分：间质面积与视野总面积之比介于5％-19％；2分：间质面积与视野总面积之比介于20％-39％；3分：间质面积与视野总面积之比介于40％-57％；4分：间质面积与视野总面积之比≥60％。每张切片取20个不重叠的视野，分别对每个视野进行打分，取平均值为该标本的终值。免疫组织化学评分标准：根据肾间质小管细胞阳性着色的程度分为5级：阴性计0分；微量着色计0.5分；轻度着色计1分；中度着色计2分；广泛着色计3分，每张切片取20个不重叠视野计分，取均值作为该片最终计分。统计学分析时所有数据用-x±s表示，利用SPSS15.0统计软件进行统计学分析，采用单因素方差分析比较各组间差异，P<0.05有统计学意义。 结果：各组实验动物血肌酐、尿素氮均无显著差异性(P>0.05)。假手术组及正常组肾脏未见明显小管损伤情况；造模组和治疗组肾小管损伤程度较假手术组明显加重(P<0.01)；治疗组与造模组相比，损伤程度则明显减轻(P<0.05，P<0.01)。假手术组及正常对照组肾间质中未见明显纤维化改变；UUO组及阿魏酸钠治疗组纤维化程度较假手术组明显加重，差异有统计学意义(P<0.05)；而阿魏酸钠治疗组纤维化程度较UUO组明显减轻，差异有统计学意义(P<0.05)。正常对照组大鼠肾脏组织中即可见t-PA表达，主要部位在肾小管上皮细胞；与正常组相比较，假手术组各对应观察点t-PA表达明显降低，差异有显著性(P<0.01)：造模组与假手术组相比，t-PA表达在术后第7、14天表达明显降低(P<0.01)；与造模组相比，治疗组术后第4、7、14天的表达比相应观察点明显增加，差异有显著性(P<0.01或P<0.05)。u-PA在正常对照组大鼠肾脏组织中即有表达，主要部位在肾小管上皮细胞。与正常组相比较，假手术组各对应观察点u-PA表达降低；造模组与假手术组相比，u-PA表达在术后第7、14天表达明显降低，差异有显著性(P<0.01)；与造模组相比，治疗组术后第1、4、7、14天的表达比相应观察点明显增加，差异有显著性(P<0.01或P<0.05)。正常对照组及假手术组动物肾脏可见PAI-1的少量表达，但两组表达无明显差异；与假手术组相比较，造模组术后第7、14天表达表达明显增加，其差异有显著性(P<0.01)；在治疗组，术后第1、4天与UUO手术组对应观察点相比较，PAI-1表达无明显改变，而术后第7、14天与对应观察点相比较，PAI-1表达明显减少，差异有显著性(P<0.01)。正常对照组及假手术组动物肾脏可见Col Ⅰ及Col Ⅲ的少量表达，但两组表达无明显差异；与假手术组相比较，UUO组及治疗组Col Ⅰ、Col Ⅲ的表达在术后第7、14天明显增加(P<0.01)，而与UUO组相比，阿魏酸钠治疗组在术后第7、14天Col Ⅰ及Col Ⅲ的表达明显降低(P<0.01)。 结论：在UUO术后，肾小管损伤和纤维化程度随梗阻时间延长而加重；肾间质纤维化过程中，t-PA及u-PA表达水平逐渐降低，而PAI-1、Col Ⅰ及Col Ⅲ表达水平逐渐增高；阿魏酸钠可能通过下调PAI-1表达水平及上调u-PA、t-PA表达水平而发挥抑制肾间质纤维化的作用。

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PA/PAI与肾间质纤维化的关系的探讨(综述)

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