散血草对裸鼠模型血管瘤生长及Fas/FasL表达影响的研究

摘要

目的：观察散血草对裸鼠模型血管瘤生长及Fas/FasL表达的影响,探讨散血草对血管瘤的治疗作用及其可能机制。 方法：手术切除的婴幼儿增生期血管瘤新鲜标本,采用组织块移植法将小组织块(3mm×4mm× 5mm)移植于无特殊病原体级裸鼠皮下,每只皮下移植2个瘤体组织,制成婴幼儿血管瘤裸鼠异种移植动物模型。移植30d后,在移植成功的65只裸鼠中,随机选取5只观察瘤体生长情况并测量瘤体大小后处死,取出移植后瘤体组织行石蜡包埋并制成切片,作初始对照。余下的60只荷瘤裸鼠随机分为3个组,并各组测量瘤体大小,每组20只,40个瘤体：凡士林组,散血草组和曲安奈德组。3个组分别给予不同用药措施：凡士林组在瘤体表面涂抹凡士林和二甲基亚砜搽剂,每日一次；散血草组在瘤体表面涂抹散血草搽剂,每日一次；曲安奈德组在瘤体内均匀注射曲安奈德注射液0.05ml(4mg/ml),仅在实验开始时注射一次。三组裸鼠喂养条件相同,观察移植瘤体的生长变化情况。用药后7d、14d、21d、28d,分别处死各组实验裸鼠5只,取出血管瘤组织,测量瘤体大小后石蜡包埋并制成切片。将所有的切片进行苏木精-伊红(hematoxylin-eosin, HE)染色组织学分析,免疫组织化学染色检测Fas、FasL、天冬氨酸蛋白水解酶 (cysteinyl aspartate specific proteinase,caspase)8的表达,采用脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记(terminal deoxynucleotidyl transferase mediated dUTP nick-end labeling, TUNEL)法检测细胞凋亡。利用统计学软件SPSS 20.0分析实验数 据,以P<0.05为具有统计学差异。 结果：1、用药前处死的5只裸鼠共10个瘤体,生长良好,瘤体的体积大小与各实验裸鼠瘤体无差异(P>0.05)。HE染色瘤体呈增生期改变。Fas、FasL、caspase-8表达阳性指数分别为28.56±2.43、18.31±1.92、17.48±1.63,TUNEL法检测细胞凋亡指数6.79± 1.33。2、用药后,凡士林组裸鼠血管瘤瘤体继续生长,体积持续增大,标本切片镜下观测血管瘤呈增生改变。散血草组、曲安奈德组血管瘤瘤体体积与用药前相比均有减小(P<0.05)。组织切片HE染色观察到血管减少,瘤体萎缩、退化,血管腔闭塞、破裂,血管间纤维脂肪组织浸润。3、散血草组用药后Fas、FasL、caspase-8表达阳性指数增加,以用药后7d增加最明显,用药后7d、14d、21d,与用药前以及凡士林组和曲安奈德组相同时间点比较有明显差异(P<0.05)；用药后28d,与用药前以及凡士林组和曲安奈德组相同时间点比较无差异(P>0.05)。曲安奈德组和凡士林组用药后Fas、FasL、caspase-8表达阳性指数与用药前无明显增加(P>0.05)。4、用药后散血草组和曲安奈德组细胞凋亡增多,凋亡指数与用药前以及凡士林组各时间点相比均明显增加(P<0.05)。 结论：1、散血草外用可以促进裸鼠模型瘤体的消退。2、散血草使裸鼠模型血管瘤瘤体组织Fas、FasL、caspase-8的表达明显增加。3、散血草促进裸鼠模型血管瘤的消退可能与Fas/FasL介导的细胞凋亡有关。

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前言

材料与方法

1 实验材料与仪器

2 实验方法

3 统计学分析

结果

1 模型瘤体的变化

2 标本大体观察

3 HE染色光镜观察

4 免疫组化检测Fas、FasL、caspase-8的表达情况

5 瘤体组织细胞凋亡情况（各组瘤体细胞凋亡指数情况见表5）

讨论

1、散血草对裸鼠模型瘤体生长的影响。

2、散血草对裸鼠模型瘤体组织Fas、FasL、caspase-8表达的影响。

３、散血草促进裸鼠模型瘤体消退的可能机制。

结论

参考文献

英汉缩略词对照表

致谢

婴幼儿血管瘤细胞凋亡的研究进展

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