S1P1-3在自发性高血压大鼠阴茎海绵体中的表达

摘要

目的:高血压与勃起功能障碍(ED)之间有密切联系，高血压并发ED可能与高血压状态下阴茎海绵体组织内皮功能障碍、eNOS活性及表达下调以及RhoA/Rho激酶信号通路上调有关，而eNOS、RhoA/Rho激酶的上游调控与1磷酸鞘氨醇(S1P)有关，S1P是一类具有生物活性的鞘脂介质，作为一个细胞外配体，与其相应的细胞膜受体—S1P受体(SIPreceptor)相结合触发相应的细胞信号转导，与不同的S1P受体结合发挥不同的生物学效应。而高血压状态下S1P与eNOS、RhoA/Rho激酶的关系目前不清楚。本研究在于探讨自发性高血压大鼠(SHR)与正常血压大鼠(WKY)阴茎海绵体内1磷酸鞘氨醇受体1-3(S1P1-3)表达的变化，阐明S1P1-3在阴茎勃起中的作用及其与eNOS/NO、RhoA/Rho激酶信号通路之间的关系。
　　方法:成年健康雄性SPF级SHR与WKY大鼠各10只，14周龄大小，体重约为250-300g，随机分为SHR组、WKY对照组。麻醉前首先称量大鼠体重，以1％戊巴比妥钠30mg/kg腹腔内注射麻醉各组大鼠，仔细分离并暴露出大鼠右侧颈总动脉，用充满肝素生理盐水的26G针头穿刺成功后将其连接于压力换能器，连续监测大鼠颈动脉平均动脉压(MAP)的变化。沿下腹正中线打开腹腔，于前列腺两侧叶后方找到星状的海绵体盆神经节作为电刺激点，以充满肝素生理盐水的24 G针头插入大鼠阴茎海绵体固定并连接到压力换能器，测定大鼠海绵体内压(ICP)。给予海绵体盆神经节不同强度的电刺激（刺激强度分别为0V、3V、5V，波幅为5ms，刺激频率12Hz，持续刺激时间45s，刺激时间间隔3min）。采用压力换能器记录ICPmax/MAP值。实验大鼠勃起功能测定完毕后，取阴茎海绵体标本并采血，检测两组大鼠血清睾酮水平及血清S1P水平。将阴茎海绵体标本分为两部分，一部分立即用于免疫组化分析，另一部分子-80℃超低温冰箱保存，供Western-blot实验分析。免疫组化和Western-blot印迹方法分别检测S1P1-3、P-eNOS(Ser-1177)、eNOS、ROCK1、ROCK2在大鼠阴茎海绵体中的表达。
　　结果:血清睾酮水平SHR组(430.89±98.67) ng/dl与对照组(492.93±54.23) ng/dl无显著差异。0V电压时SHR组ICPmax/MAP比值(0.109±0.014)较对照组(0.155±0.011)显著降低(P＜0.05);3V、5V电刺激海绵体盆神经节后SHR组ICPmax/MAP比值（0.190±0.013、0.219±0.014）均较对照组（0.393±0.018、0.524±0.019）极显著降低(P＜0.01)。血清S1P水平SHR组(4.156±0.362)ng/ml与对照组(4.549±0.876) ng/ml无显著差异。免疫组化结果显示S1P1主要表达在血管内皮细胞胞膜，S1P2主要表达在海绵体平滑肌细胞和血管内皮细胞，S1P3主要表达在血管内皮细胞胞膜和海绵体平滑肌细胞，P-eNOS、eNOS主要表达于血管内皮细胞和海绵窦腔内，ROCK1、ROCK2主要表达于海绵体血管平滑肌细胞胞浆中，阳性颗粒呈棕黄色染色。免疫组化数据分析采用积分光密度值(IOD)表示，显示S1P1、P-eNOS、eNOS在SHR组表达显著低于对照组(P＜0.05)，S1P2、S1P3、ROCK1、ROCK2在SHR组表达显著高于对照组(P＜0.05)。Western blot印迹显示S1P1、P-eNOS、eNOS在SHR阴茎海绵体中表达的相对光密度值较对照组显著降低(P＜0.05)，S1P2、S1P3、ROCK1、ROCK2在SHR阴茎海绵体中表达的相对光密度值较对照组显著升高(P＜0.05)。
　　结论:高血压并发ED可能与阴茎海绵体内S1P1表达下调并抑制eNOS/NO信号通路，S1P2、S1P3表达升高并激活RhoA/Rho激酶信号通路有关。

目录

摘要

前言

材料和方法

1 实验动物来源

2 主要实验试剂和实验相关仪器

3 实验方法

4 统计学分析

结果

1 两组大鼠体重、血清睾酮(T)、颈动脉平均动脉压(MAP)、S1P比较

2 两组大鼠ICPmax／MAP比较

3 免疫组化测定大鼠阴茎海绵体内S1P1-3、P-eNOS、eNOS、ROCK1、ROCK2表达

4 Western blot印迹测定大鼠阴茎海绵体内S1P1-3、P-eNOS、eNOS、ROCK1、ROCK2表达

讨论

结论

参考文献

英汉缩略词对照表

致谢

综述 难治性勃起功能障碍的研究进展

声明