大鼠溃疡性结肠炎实验模型中COX-2表达及其受维药溃结安干预研究

摘要

目的：建立大鼠溃疡性结肠炎实验模型及维药西帕依溃结安干预方法，观察结肠组织中COX-2 mRNA表达水平及其受维药西帕依溃结安治疗作用的影响，探讨COX-2在溃疡性结肠炎发病和发展过程中的作用；构建大鼠COX-2基因的真核表达GFP重组载体pcDNA3.1/CT-GFP-TOPO-COX-2，应用基因枪技术将其转导入活体结肠组织，检测外源性蛋白GFP在大鼠活体结肠组织中的表达，从而探索溃疡性结肠炎发病基因敏感点，为寻找维药西帕依溃结安的基因作用靶点奠定基础。 方法：制备大鼠溃疡性结肠炎模型，实验动物分为溃疡性结肠炎模型组、正常组、溃结安干预组、5-氨基水杨酸(5-ASA)阳性对照组、生理盐水(NS)阴性对照组共5组。采用RT-PCR的方法，检测各组结肠组织COX-2的mRNA表达差异；克隆COX-2的cDNA长片段，构建大鼠COX-2基因的真核表达GFP重组载体，应用基因枪技术转导入大鼠活体结肠中，Western blot方法检测外源性COX-2绿色荧光融合蛋白在实验动物体内的表达水平。 结果：与正常组及生理盐水(NS)阴性对照组相比，模型组结肠组织中COX-2表达显著增高(P<0.05)。与模型组相比5-氨基水杨酸(5-ASA)阳性对照组、溃结安药物干预组COX-2表达显著降低(P<0.05)。运用基因枪技术转导pcDNA3.1/CT-GFP-TOPO-COX-2重组载体，24小时后可以检测到大鼠结肠组织中有外源性COX-2绿色荧光融合蛋白的表达。 结论：COX-2参与了溃疡性结肠炎发生、发展过程，而维药西帕依溃结安可能正是通过抑制了COX-2的活性而发挥其治疗作用。为了进一步探讨其分子生物学作用机理，我们成功构建了大鼠COX-2基因的真核表达GFP重组载体pcDNA 3.1/CT-GFP-TOPO-COX-2，并且运用基因枪技术可以有效地将其转导入大鼠活体结肠组织内，为进一步应用RNA干扰技术明确溃结安的基因作用靶点奠定基础。

目录

论文说明：中英文缩略词对照表

声明

摘要

前言

材料与方法

1.主要仪器设备

2.材料

2.1动物与药物

2.2普通化学试剂

2.3特殊试剂

3.实验方法

3.1动物随机分组、大鼠溃疡性结肠炎实验模型的建立与药物干预

3.2分子生物学实验方法

实验结果

讨论

小结

致谢

参考文献

综述 RNA干扰作用在基因功能和基因治疗研究方面的应用进展

攻读硕士学位期间发表的学术论文

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