犬粪细粒棘球绦虫PCR诊断试剂盒的研制

摘要

目的：提取细粒棘球绦虫感染的犬粪便DNA，建立犬粪细粒棘球绦虫巢式PCR诊断方法，对本方法敏感性、特异性及在包虫病流行病学调查中应用价值进行评价。
　　 方法：收集和丰县牧区家犬30只，解剖检查，收集粪便、成虫标本；实验室感染细粒棘球绦虫犬8只，从感染第1天每天收集粪便标本，至41天，犬解剖检查，收集成虫标本。成虫和粪便中虫卵标本进行形态学鉴定；提取成虫虫体DNA，进行PCR扩增，扩增产物测序鉴定，结果均为细粒棘球绦虫感染，进行后续试验。提取犬粪便DNA，进行巢式PCR技术扩增，扩增产物鉴定。建立犬粪细粒棘球绦虫PCR诊断方法，对此诊断方法敏感性和特异性进行鉴定。
　　 结果：成虫和粪便中虫卵标本形态学鉴定为细粒棘球绦虫成虫和虫卵；成虫虫体DNA扩增产物琼脂糖凝胶电泳鉴定，目的片段与设计的预期片段长度一致；测序鉴定，结果与GenBank中的细粒棘球绦虫CO1基因序列AF2976617（G1）比对相似性为99%。犬粪便DNA巢式PCR扩增产物，琼脂糖凝胶电泳鉴定，目的片段与设计的预期片段长度一致；测序鉴定，测序结果与GenBank中的细粒棘球绦虫12S核糖体RNA基因AF288824比对相似性为99%。实验室感染细粒棘球绦虫犬粪便DNA PCR扩增阳性率为90.34%；最早在感染第17天起，粪便DNA可扩出目的片断；家犬解剖检查时检出细粒棘球绦虫的犬，粪便DNA PCR扩增阳性率为100%。犬肠道内有其他虫种感染时不发生交叉反应。感染犬虫体负荷量在5~1000条时用本方法都可扩增出目的条带。
　　 结论：建立犬粪细粒棘球绦虫巢式PCR诊断方法，本方法检测细粒棘球绦虫感染的犬时稳定性较好；敏感性、特异性均较高，表明本法是一种可早期、快速、准确的诊断犬细粒棘球绦虫感染的方法。

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棘球绦虫终末宿主感染状况及其检测方法

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