小鼠脂肪源干细胞的体外分离培养及成骨诱导前后造血调控相关因子表达的实验研究

摘要

目的：探寻小鼠ADSCs的体外分离培养方法以及成骨诱导前后造血调控因子分子水平的表达情况。方法：采用酶消化法获得脂肪来源的细胞，传代培养至第三代，分别进行成脂与成骨细胞诱导，用实时荧光定量多聚酶链反应(qRT-PCR)检测成骨诱导前后的造血调控因子β-catenin、SDF-1、N-cadherin、SCF、MIP-1α和Jag1，GM-CSF的表达。同时采用流式细胞仪测定ADSCs细胞表面标志物CD29、CD34、CD106、CD49d的表达。结果：小鼠脂肪来源的细胞在体外培养过程中，呈梭形贴壁生长，可稳定传代；细胞表面标志的流式细胞仪检测：CD29表达率强阳性，CD34表达率较低，CD106、CD49d低表达；进行成脂细胞诱导后，油红“O”染色呈阳性，成骨细胞诱导后，茜素红染色和von Kossa染色均为阳性，表明其是ADSCs。通过qRT-PCR检测多种造血调控因子相对表达量，发现β-catcnin表达量最高，SDF-1和N-cadherin次之，其余各因子SCF、MIP-1α、Jag1、GM-CSF均为低表达。统计分析后，发现各因子在成骨诱导前后表达差异均无统计学意义。结论：本研究证实，小鼠脂肪来源的细胞具有MSC特征就是ADSCs，其成骨诱导前后的造血调控因子均有不同程度的表达，但差异无统计学意义。