复方骆驼蓬子软膏质量标准及其新型亲水性凝胶剂的研究

摘要

目的：提高上市产品复方骆驼蓬子软膏的质量标准。研究秋水仙、天仙子药材的主要有效成分的质控方法。同时，在研究骆驼蓬子、秋水仙、天仙子药材生物碱有效组分的基础上，开展复方骆驼蓬子生物碱有效组分的亲水性组分配伍凝胶剂的研究，为复方骆驼蓬子软膏的新剂型研究和二次开发奠定基础。
　　方法:采用硅胶HSGF254薄层板，以乙酸乙酯-甲醇-氨水(17:2:1)为展开剂，以碘化铋钾试液和0.8 mol/L亚硝酸钠溶液为显色剂，分别以骆驼蓬碱、去氢骆驼蓬碱、鸭嘴花碱、东莨菪碱、阿托品和秋水仙碱等活性生物碱类成分为指标，分别对复方中的骆驼蓬子、天仙子和秋水仙药材进行定性鉴别。采用Boston LunaC18(150mm×4.6 mm,5μm)为色谱柱，以乙腈-醋酸铵缓冲液(3.4 g乙酸铵＋3 mL冰乙酸＋500 mL水)为流动相梯度洗脱，检测波长265 nm，对复方骆驼蓬子软膏中活性成分鸭嘴花碱、骆驼蓬碱和去氢骆驼蓬碱进行含量测定，初步完善复方骆驼蓬子软膏的质量标准。采用 Symmetrix ODS-H色谱柱，以乙腈-0.1％三氟乙酸水(28:72)为流动相，检测波长350 nm，以1.0 mL/min的流速对秋水仙药材中秋水仙碱的含量进行定量测定。采用 Symmetrix ODS-H色谱柱，以乙腈-0.1%三氟乙酸水(14∶86)为流动相，检测波长210 nm，流速1.0 mL/min，测定天仙子药材中东莨菪碱和莨菪碱的含量。以秋水仙碱、东莨菪碱、莨菪碱的吸附量和解吸率为考察指标，采用大孔树脂分离纯化秋水仙、天仙子总生物碱有效组分。分别考察秋水仙碱，东莨菪碱、莨菪碱在5种不同类型的大孔吸附树脂(LSA5B、LSA21、LSD001、HPD600、D101)上的吸附和解吸附行为，并分别考察药液pH值、吸附流速、洗脱流速等参数对秋水仙药材中的秋水仙碱，天仙子药材中东莨菪碱、莨菪碱等生物碱的吸附和洗脱效果的影响，最大程度地富集秋水仙和天仙子中的生物碱有效组分。在前期骆驼蓬子生物碱有效组分研究的基础上，依据复方组分配伍原理，以骆驼蓬子、天仙子、秋水仙生物碱有效组分为原料制备复方骆驼蓬子亲水性组分配伍凝胶剂。以骆驼蓬碱和去氢骆驼蓬碱的经皮累积渗透量为指标，对基质卡波姆浓度、促渗剂氮酮浓度、保湿剂甘油的用量、潜溶剂丙二醇的用量和pH调节剂三乙醇胺的用量等因素进行考察。在单因素试验的基础上，选择对复方骆驼蓬子亲水性组分配伍凝胶剂经皮渗透性影响较显著的因素作为考察对象，采用星点设计-效应面法对凝胶剂进行处方工艺筛选。根据4h内骆驼蓬碱和去氢骆驼蓬碱的经皮累积渗透量之和建立最佳数学模型并描绘效应面，对复方骆驼蓬子亲水性组分配伍凝胶剂的处方工艺进行优化。
　　结果:以骆驼蓬碱、去氢骆驼蓬碱、鸭嘴花碱、东莨菪碱、阿托品和秋水仙碱等活性生物碱类成分为指标建立的TLC方法能有效地对复方骆驼蓬子软膏中骆驼蓬子、天仙子和秋水仙等3味药材进行定性鉴别。以鸭嘴花碱、骆驼蓬碱和去氢骆驼蓬碱为指标建立的高效液相色谱法能快速的测定复方骆驼蓬子软膏中生物碱类活性成分的含量。方法学考察表明鸭嘴花碱、骆驼蓬碱和去氢骆驼蓬碱的线性范围1.0056～201.12μg/mL(r=0.9998)、1.0016～200.32μg/mL(r=0.9998)和0.8599~171.99μg/mL(r=0.9996)，平均回收率分别为98.12%，97.13%和98.29%，方法的日内日间精密度RSD值均小于2%。测定3批复方骆驼蓬子软膏中鸭嘴花碱、骆驼蓬碱和去氢骆驼蓬碱的含量分别为0.17%~0.34%、0.27%~1.23%和0.77%~1.17%。但同一批制剂的含量测定结果偏差较大，说明制剂复方骆驼蓬子软膏的质量均一性存在问题，有待解决。以秋水仙碱为指标成分建立的秋水仙药材的HPLC含量测定方法能有效地控制秋水仙药材的质量。方法学考察表明秋水仙碱在2.5~160.0μg/mL范围内的线性关系良好(r=0.9999)，平均回收率为96.57%，RSD=0.95%。7批不同产地秋水仙药材中秋水仙碱的含量在0.02%~0.13%波动，进口药材中秋水仙碱的含量与国产药材中秋水仙碱含量差异较大，原因有待于进一步研究。以氢溴酸东莨菪碱和硫酸阿托品为指标成分建立的天仙子药材的HPLC含量测定方法能快速、简便的控制天仙子药材的质量。方法学考察表明氢溴酸东莨菪碱和硫酸阿托品的线性范围分别为4.02～513.64μg/mL(r=0.9999)和4.00~512.00μg/mL(r=0.9998)，平均回收率分别为98.41%和98.79%。测定的3批天仙子药材中东莨菪碱(以氢溴酸东莨菪碱计)和莨菪碱(以硫酸阿托品计)的含量分别为0.01%和0.02%。天仙子药材中托烷类生物碱的含量较低。采用大孔吸附树脂技术能显著的分离纯化秋水仙、天仙子总生物碱的有效组分。通过比较秋水仙碱，东莨菪碱和莨菪碱在5种不同孔径、比表面积、极性的大孔吸附树脂上的吸附行为，以弱极性的LSA5B型大孔吸附树脂对秋水仙碱，东莨菪碱、莨菪碱均有较好的富集能力。秋水仙药材中秋水仙碱在LSA5B型大孔吸附树脂上的最佳富集工艺条件为：吸附上样液的pH值为2.5，上样流速为1.5 BV/h，秋水仙碱饱和吸附量为26.49 mg/g，8 BV蒸馏水洗去水溶性杂质，最佳的洗脱溶剂为体积分数为70%乙醇，最佳洗脱流速为1.5 BV/h，洗脱用量为20 BV，秋水仙碱的洗脱率达98%。天仙子药材中托烷类生物碱在LSA5B型大孔吸附树脂上的最佳富集工艺条件为：以1.5 BV/h的流速上样，东莨菪碱和莨菪碱的饱和吸附量分别为2.835 mg/g、4.947 mg/g，4 BV蒸馏水洗去水溶性杂质，最佳的洗脱溶剂为体积分数为50%乙醇，最佳洗脱流速为1.5 BV/h，洗脱用量为10 BV，东莨菪碱和莨菪碱的洗脱率可达74%和86%。在确定的最佳大孔树脂吸附工艺条件下，得到秋水仙碱含量为11.55%的秋水仙总生物碱有效组分和东莨菪碱、莨菪碱含量为1.84%、4.02%的天仙子总生物碱有效组分。在单因素试验的基础上，考察了卡波姆浓度、氮酮浓度和三乙醇胺用量这3个对凝胶剂的经皮渗透性有显著性影响的因素，每个因素选取5个水平，以骆驼蓬碱和去氢骆驼蓬碱的经皮累积渗透量为指标，通过星点设计-效应面法优化得到复方骆驼蓬子亲水性组分配伍凝胶剂的最优处方：卡波姆934为1.00%、氮酮为1.50%，三乙醇胺为2.00%。经3批验证实验证明优化的凝胶剂其骆驼蓬碱、去氢骆驼蓬碱的经皮累积渗透量的实际值与预测值相近，相对偏差小于5%。通过星点设计-效应面法的拟合方程可以很好的预测各因素和评价指标之间的关系。
　　结论：建立的定性定量方法快速、简便、灵敏、精准、稳定,为秋水仙和天仙子药材及复方骆驼蓬子软膏的质量标准的制定和质量控制提供了依据，为复方骆驼蓬子软膏质量标准的完善和提高奠定了基础。LSA5B型大孔吸附树脂对秋水仙、天仙子总生物碱分离纯化效果好，富集能力强。在确定的工艺条件下，LSA5B型大孔吸附树脂富集制备的秋水仙的生物碱有效组分中秋水仙碱的含量比富集前提高了25倍，天仙子中生物碱有效组分中生物碱的含量比富集前提高了18倍。通过星点设计所建立的模型预测性良好，可用于预测和优化复方骆驼蓬子亲水性组分配伍凝胶剂处方。以卡波姆为基质制备的凝胶剂外观透明美观、细腻滑爽、质量均一、黏性小、易清洗,并具有良好的体外透皮效果。研究结果为进一步开展新剂型二次开发以及复方凝胶剂的质量控制、药效学实验、透皮吸收及体内代谢等研究奠定了基础。

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前言

研究内容

1 复方骆驼蓬子软膏有效组分质控标准的研究

1.1 仪器与试药

1.2 实验方法

1.3 实验结果

1.4 讨论

2 生物碱有效组分的分离纯化工艺研究

2.1 仪器与试药

2.2 实验方法

2.3 实验结果

2.4 讨 论

3 复方骆驼蓬子凝胶剂的处方工艺研究

3.1 仪器与试药

3.2 实验方法

3.3 实验结果

3.4 讨 论

小结

致谢

参考文献

综述

攻读硕士学位期间发表的学术论文

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