MMP-2、9和TIMP-1、2在食管鳞状细胞癌中的表达及其与HPV16E6、E7和E6/E7之间相互关系的研究

摘要

目的：探讨 MMP-2、9和TIMP-1、2mRNA在食管鳞状细胞癌及对应癌旁组织中的表达差异及其相关性，探讨MMP-2、9和TIMP-1、2mRNA在食管鳞状细胞癌中的表达是否存在名族差异，探讨 HPV16E6、E7及E6/E7与MMP-2、9和TIMP-1、2mRNA表达之间是否存在调控关系以及 HDAC是否参与了MMP-2、9和TIMP-1、2mRNA的表达调控。
　　方法：选取新鲜手术切除的食管癌标本100例，每例分别取癌组织和对应的癌旁组织各一份，分为癌组织组和癌旁组织组，采用逆转录-聚合酶链式反应法（RT-PCR）检测 MMP-2、9和TIMP-1、2mRNA在癌组织组及其对应癌旁组织组中的表达；随机选取部分标本行Western-blot检测，验证这4种基因在蛋白水平的表达是否与转录水平一致；构建HPV16 E6真核表达载体、HPV16E7真核表达载体及HPV16E6/E7融合基因真核表达载体，运用瞬时转染技术将上述三种真核表达载体分别转染到HPV16阴性的食管癌细胞株KYSE450中，然后通过RT-PCR法分别检测转染后食管癌细胞株KYSE450中MMP-2mRNA、MMP-9mRNA、TIMP-1mRNA及TIMP-2mRNA的表达情况；通过向KYSE450细胞培养基中加入HDAC抑制剂TSA，然后通过RT-PCR法分别检测加TSA后食管癌细胞株KYSE450中MMP-2mRNA、MMP-9mRNA、TIMP-1mRNA及TIMP-2mRNA的表达情况。
　　结果：MMP-2、9mRNA和TIMP-1、2mRNA在食管癌组织中的表达高于相应正常组织中的表达；MMP-2、9mRNA和TIMP-1、2mRNA在汉族食管癌组织中的表达高于其在哈族食管癌组织中的表达；MMP-2、9mRNA和TIMP-1、2mRNA在浸润深度为T3+T4的癌组织中的表达高于其在浸润深度为T1+T2的癌组织中的表达；MMP-2、9mRNA和TIMP-1、2mRNA在有无淋巴结转移的癌组织中的表达差别无统计学意义；MMP-2、9mRNA和TIMP-1、2mRNA在不同性别、不同年龄、不同分化程度之间的表达差别均无统计学意义；MMP-2mRNA与MMP-9mRNA之间呈正相关，而与与TIMP-1mRNA和TIMP-2mRNA之间均无相关性；MMP-9mRNA与 TIMP-1mRNA和TIMP-2mRNA之间均呈正相关；TIMP-1mRNA和TIMP-2mRNA之间呈正相关；MMP-2 mRNA在各pEGFP-N1转染组中的表达均极低，且无统计学差异，MMP-9 mRNA在空白对照组和pEGFP-N1转染组中均有表达，且表达量相对较高，但在pEGFP-N1-E6转染组、pEGFP-N1-E7转染组及pEGFP-N1-E6/E7转染组中表达均极低，E6组、E7组及E6/E7组与阴性对照组之间均存在差异；TIMP-1 mRNA在pEGFP-N1-E6转染组中表达与阴性对照组之间无差异，在pEGFP-N1-E7转染组中的表达显著降低，与阴性对照组之间差异有差异；在pEGFP-N1-E6/E7转染组中的表达也增高，与阴性对照组之间有差异；TIMP-2 mRNA在 pEGFP-N1-E6转染组中表达增高，与阴性对照组之间有差异；在pEGFP-N1-E7转染组中的表达降低，与阴性对照组之间无差异；在 pEGFP-N1-E6/E7转染组中的表达增高，与阴性对照组之间有差异。MMP-2mRNA在TSA实验组中的平均表达量与对照组相比无差异，MMP-9mRNA在TSA实验组中的平均表达量与对照组相比无差异，TIMP-1mRNA在 TSA实验组中的平均表达量与对照组相比无差异，TIMP-2mRNA在TSA实验组中的平均表达量与对照组相比有差别，差异有统计学意义。
　　结论：MMP-2、9和TIMP-1、2在食管癌组织中的表达高于相应正常组织中的表达，说明它们可能参与了食管鳞状细胞癌的发生及进展；MMP-2、9和TIMP-1、2的表达可能与食管鳞状细胞癌浸润有关，但可能与淋巴结转移无关，与患者年龄、性别及肿瘤分化程度均无关；MMP-2、9和TIMP-1、2在食管鳞状细胞癌中的表达可能存在名族差异；MMP-2mRNA与 MMP-9mRNA在食管癌中的表达呈正相关关系，MMP-2mRNA与TIMP-1mRNA和TIMP-2mRNA在食管癌中的表达之间均无相关性；MMP-9mRNA与TIMP-1mRNA和TIMP-2mRNA在食管癌中的表达之间均呈正相关；TIMP-1mRNA和TIMP-2mRNA在食管癌中的表达呈正相关关系；本研究成功构建了HVP16-E6、HPV16-E7基因及HPV16-E6/E7融合基因的真核表达载体，并成功转染了食管癌KYSE450细胞；HPV16 E6和HPV16 E7基因与MMP-2的表达可能不存在调控关系，可能对MMP-9的表达起抑制作用；HPV16 E6/E7的协同作用可能对TIMP-1和TIMP-2的表达起促进作用；HDAC可能与TIMP-2的表达之间存在调控关系；与MMP-2、MMP-9及TIMP-1的表达之间可能不存在调控关系。

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中文摘要

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前言

第一部分 MMP-2和MMP-9在食管鳞癌组织中的表达及临床意义

1 研究内容与方法

2 结果

3 讨论

4 小结

第二部分 TIMP-1和TIMP-2在食管鳞癌组织中的表达及临床意义

1 研究内容与方法

2 结果

3 讨论

4 小结

第三部分 HPV16E6E7基因及HDAC抑制剂TSA对KYSE450细胞中MMP-2、MMP-9、TIMP-1和TIMP-2表达的影响

1 材料与方法

2 结果

3 讨论

4 小结

结论

致谢

参考文献

综述

攻读博士学位期间获得的学术成果

个人简历

新疆医科大学博士研究生学位论文导师评阅表