高良姜总黄酮影响宫颈癌细胞增殖、凋亡及基因表达调控的机理研究

摘要

目的：研究高良姜总黄酮对人宫颈癌细胞株SiHa的增殖、形态学变化和其细胞凋亡并对相关肿瘤干细胞标记物转录表达水平的影响，探讨高良姜总黄酮的抗肿瘤作用机理，为高良姜总黄酮作为抗肿瘤药物开发提供理论和实验依据。
　　方法：
　　1）根据原有的工艺，采用乙醇提取，石油醚脱脂，氯仿萃取等方法得到高良姜总黄酮；
　　2）用倒置显微镜观察不同浓度高良姜总黄酮在不同时间内作用于宫颈癌SiHa细胞后的形态学变化；
　　3）采用四甲基偶氮唑盐（MTT）显色法，检测不同浓度高良姜总黄酮在不同时间内对宫颈癌SiHa细胞存活和生长所产生的不同影响，设抗癌药顺氯氨铂（cis-Dichlorodiamineplatinum，DDP）为阳性对照；
　　4）通过Annexin V-FITC/PI双染色、流式细胞仪检测并分析高良姜总黄酮对SiHa细胞24h作用而引起的细胞凋亡率，设抗癌药顺氯氨铂（DDP）为阳性对照；
　　5）Trizol一步法抽提高良姜总黄酮干预的SiHa细胞总RNA，并应用荧光定量PCR法，签定高良姜总黄酮诱导SiHa细胞的肿瘤干细胞标志物基因转录表达水平；
　　6）统计学方法：实验数据以mean±SD表示，以SPSS17.0版专用统计分析软件对各组数据进行一般线性模型单变量方差分析。
　　结果：
　　1）从高良姜提取的总黄酮在0～400μg/ml浓度范围内，随着高良姜总黄酮干预SiHa细胞的剂量增加，细胞活力显著下降（12％），其IC50值为（24h的127.393μg/ml，48h的84.584μg/ml，72h为58.054μg/ml）抑制细胞活力的趋势与阳性对照基本一致，并呈浓度和时间依赖性；
　　2）流式细胞仪检测显示，在50和100μg/ml高良姜总黄酮剂量引起SiHa细胞凋亡，其早期凋亡率升高（17.35%和22.4%），但是远远低于阳性对照组的早期凋亡率（60.4%）；
　　3）高良姜总黄酮干预宫颈癌细胞株 SiHa后可使OCT4，ALDH1A1的转录表达水平有显著降低（P＜0.05），而对TWIST1的转录表达水平的影响均无统计学意义（P＞0.05）。
　　结论：
　　1）高良姜总黄酮能够抑制宫颈癌细胞的增殖、诱导细胞凋亡，其作用有剂量和时间依赖性；
　　2）高良姜总黄酮干预宫颈癌细胞SiHa可能引起ALDH1A1和OCT4等肿瘤干细胞标记物的基因表达下调，是该药抗癌作用的一部分分子机制。

目录

封面

声明

中英文缩略词对照表

目录

中文摘要

英文摘要

前言

材料与方法

1 材料与仪器

1.1 实验材料

1.2 主要仪器设备

1.3 主要试剂

1.4 软件

2 实验方法

2.1 高良姜总黄酮的提取

2.2 高良姜总黄酮干预SiHa 宫颈癌细胞及其对细胞增殖与凋亡的影响

2.3 高良姜总黄酮干预SiHa 宫颈癌细胞及其对肿瘤干细胞标记物表达调控的影响

2.4 统计分析

结果

1 高良姜总黄酮干预对SiHa宫颈癌细胞形态结构的影响

2 高良姜总黄酮干预对SiHa宫颈癌细胞增殖活力的影响

3 高良姜总黄酮对 SiHa 宫颈癌细胞凋亡的影响--流式细胞仪检测结果

4 高良姜总黄酮干预SiHa细胞对肿瘤干细胞标记物表达水平的影响--定量RT-PCR鉴定结果

讨论

1 高良姜总黄酮对宫颈癌SiHa细胞的增殖活力及凋亡的研究

2 高良姜总黄酮对宫颈癌相关肿瘤干细胞标记物表达调控的影响

小结

致谢

参考文献

综述: 高良姜黄酮类化合物影响宫颈癌细胞活力及凋亡的研究进展

攻读硕士学位期间发表的学术论文

新疆医科大学硕士研究生学位论文导师评阅表