包虫病所致过敏反应中免疫耐受机制的实验研究

摘要

目的：包虫病是全球人畜共患性疾病。包虫病所致的过敏性休克是其严重并发症，占包虫病患者突然死亡原因的20％。包虫病患者存在免疫耐受已被证实，但是这种状态在包虫囊液外溢时发生转变，过敏性休克发生，具体机制尚待阐明。为此，本研究在完善囊型包虫病所致过敏反应动物模型、优化小鼠过敏反应评价体系的基础上，探讨以Treg细胞为核心的“免疫耐受调节网络”中相关重要因子在囊型包虫病所致过敏反应中的变化及特点，以及地塞米松预处理对囊型包虫病所致过敏反应的影响及机制，为制定针对囊型包虫病所致过敏反应的有效防治策略奠定理论基础。
　　方法：⑴羊源细粒棘球蚴原头节及囊液均采自包虫感染羊肝脏。包虫感染组，每只小鼠通过腹腔接种粒棘球蚴原头节2000个，建立囊型包虫感染模型，再应用羊源细粒棘球蚴粗制囊液0.1ml/10g攻击发敏建立囊型包虫病所致过敏反应模型。通过观察过敏症状、肛温变化、肺组织HE染色病理切片，测定肺泡灌洗液中白细胞分类计数、过敏介质组胺及 PAF-AH水平，测量血清抗体水平等一系列指标，全面优化过敏评价体系，完善过敏模型建立；⑵BALB/c小鼠随机分成健康对照组、包虫感染组、囊液致敏组。使用全面的过敏评价体系评价过敏模型。FCM检测小鼠淋巴结来源PBMCs中DCs、Treg细胞水平，ELISA检测血清IgE、IgG、IgG1、IL-10、TGF-β1、IL-13、IL-17A水平；⑶C57BL/6小鼠随机分成健康对照组、单纯囊液致敏组，地塞米松预处理组。在包虫囊液致敏前30min腹腔注射地塞米松建立地塞米松预处理模型。使用全面的过敏评价体系评价过敏模型。FCM检测小鼠淋巴结来源 PBMCs中Treg细胞水平，ELISA检测血清IgE、IgG、IgG1、IL-10、TGF-β1、IL-13水平。
　　结果：①BALB/c小鼠包虫接种成功率为75%，C57BL/6小鼠包虫接种成功率为65%，囊型包虫病所致过敏模型成功率为分别为93.33%和85.62%。发生过敏反应小鼠出现了不同程度的过敏症状、肛温下降、肺组织HE病理切片及BALF中炎性细胞增加、组胺表达量增加、血清抗体IgE、IgG、IgG1水平增加。上述指标均表明BALB/c和C57BL/6小鼠囊型包虫病所致过敏反应模型建立成功；②与健康对照组相比，包虫感染组及囊液致敏组小鼠血清IgE水平均明显增加（P＜0.01）。囊液致敏组小鼠血清IgE水平明显高于包虫感染组(P＜0.05)。囊液致敏后，肺组织病理及BALF中炎性细胞增加、组胺表达水平增加、血清IL-13、IL-17A水平增加（P＜0.05）。与健康对照组相比，小鼠血清IL-10、TGF-β1水平及CD4+CD25+Foxp3+Treg/CD4+细胞比例在包虫感染组增加，在囊液致敏组下降（P＜0.001），呈现先升后降的双向变化。但是其他 T细胞群，如 CD4+CD25+Foxp3-细胞比例、CD4+Foxp3+CD25-细胞比例，各组间比较无明显差异。CD11c+IA/IE+CD86+细胞比例、CD11c+IA/IE+CD80+细胞比例以及CD4/CD8比例，各组间比较无明显差异；③小鼠严重过敏反应发生率在地塞米松预处理组是12.5%，单纯囊液致敏组是37.5%。与单纯囊液致敏组相比，地塞米松预处理组小鼠肺组织及BALF中炎性细胞降低、组胺表达水平减少、IgE水平降低、血清IL-13水平降低（P＜0.001）。血清IL-10及TGF-β1水平与CD4+CD25+Foxp3+Treg/CD4+细胞比例变化趋势相同，均在单纯囊液致敏组下降，在地塞米松预处理组增加。
　　结论：⑴全面的小鼠过敏评价体系优化了囊型包虫病所致过敏反应小鼠动物模型，为探讨包虫病所致过敏反应中免疫耐受机制奠定基础；⑵以Treg细胞为核心的“免疫耐受调节网络”维持了包虫感染后的免疫耐受状态，细粒棘球蚴囊液致敏后，网络失衡，诱发过敏反应；⑶包虫感染后以Treg细胞为核心的“免疫耐受调节网络”通过CD25、Foxp3高表达，IL-10、TGF-β1高分泌水平，维持免疫耐受功能。囊液致敏后，免疫耐受状态发生转变，Treg细胞比例下降，IL-10、TGF-β1水平降低，IL-17A、IL-13水平升高，发生过敏反应；⑷在包虫病所致的过敏反应中，地塞米松可通过降低IgE水平，减少肺组织及BALF中炎性细胞渗出，减少靶器官过敏介质组胺释放，减轻过敏反应；⑸地塞米松通过上调 Treg细胞比例及功能维持“免疫耐受调节网络”功能。其具体机制是上调IL-10和TGF-β1水平，抑制Th2细胞因子IL-13水平。

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前言

第一部分 包虫病所致过敏反应小鼠动物模型的建立与评价

1 研究内容与方法

2 结果

3 讨论

4 小结

第二部分 免疫耐受在包虫病所致过敏反应中的作用

1 研究内容与方法

2 结果

3 讨论

4 小结

第三部分 地塞米松对包虫病所致过敏反应免疫耐受的影响及机制

1 研究内容与方法

2 结果

3 讨论

4 小结

结论

致谢

参考文献

综述:免疫耐受在蠕虫感染及过敏反应中的研究进展

攻读博士学位期间获得的学术成果

个人简历

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