复方骆驼蓬子水凝胶贴剂的动物药效学及基于微透析技术的药动学研究

摘要

目的：复方骆驼蓬子软膏是治疗风湿性关节炎的传统维吾尔医药，为改善其剂型缺陷、提高使用方便性，我们在原方的基础上研制了复方骆驼蓬子水凝胶贴剂新制剂。本实验研究了复方骆驼蓬子水凝胶贴剂对动物急性炎症、慢性炎症、疼痛、关节炎模型的作用及皮肤刺激性，并与原制剂复方骆驼蓬子软膏进行对比，以确证水凝胶贴剂的药效作用；同时采用微透析取样技术研究了复方骆驼蓬子水凝胶贴剂与其软膏的大鼠体内药物动力学，为复方骆驼蓬子水凝胶贴剂的体内过程、透皮性能及进一步研究奠定基础。
　　方法:
　　①采用二甲苯致小鼠耳肿胀、角叉菜胶诱发大鼠足趾肿胀及棉球诱导大鼠肉芽肿实验，对比研究复方骆驼蓬子水凝胶贴剂及软膏的抗炎作用；采用小鼠醋酸扭体实验，观察比较复方骆驼蓬子水凝胶贴剂及软膏的镇痛作用；采用完全弗氏佐剂诱发大鼠关节炎试验，研究复方骆驼蓬子水凝胶贴剂及软膏的抗风湿性关节炎作用；采用新西兰兔进行复方骆驼蓬子水凝胶贴剂及软膏的完整与破损皮肤的皮肤刺激性试验。
　　②采用微透析技术、以 HPLC荧光色谱法对复方骆驼蓬子水凝胶贴剂及软膏中主要药效成分骆驼蓬碱与去氢骆驼蓬碱的大鼠体内药动学进行研究。自制了性能稳定、可用于体内微透析研究的线性和柔性微透析探针，并通过体内外微透析实验，评价其灌流速度、药物浓度对探针取样回收率的影响。采用该自制探针分别对大鼠皮肤和血液同步微透析取样，联合高效液相色谱技术实时监测皮肤和血液中的骆驼蓬碱与去氢骆驼蓬碱的浓度变化，采用DAS2.0数据处理软件以统计矩法计算药动学参数。
　　结果:
　　①与基质组比较，复方骆驼蓬子软膏和水凝胶贴剂高、中、低三个剂量组均可抑制小鼠耳肿胀的急性炎症（P<0.05），抑制角叉菜胶致大鼠脚肿胀的亚急性炎症（P<0.05），抑制棉球致大鼠肉芽肿增生的慢性炎症（P<0.05），抑制对醋酸所致的扭体疼痛（P<0.05）；对于慢性炎症和亚急性炎症，复方骆驼蓬子贴剂高、中剂量组作用优于软膏组（P<0.05）；对于急性炎症和镇痛作用二者作用相当；对于完全弗氏佐剂诱发大鼠关节炎的作用，病理切片显示复方骆驼蓬子软膏的高剂量组和贴剂的中、高剂量组均有良好的作用；复方骆驼蓬子软膏和凝胶贴剂对新西兰家兔皮肤刺激性均轻微。
　　②高效液相荧光色谱法测定大鼠体内的骆驼蓬碱与去氢骆驼蓬碱的色谱条件为：以乙腈-醋酸铵缓冲液(3.4g乙酸铵＋0.5mL冰乙酸＋500mL水)为流动相=18:82；色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂岛津ODS-C18(5μm，250mm×4.6mm)；流速1.0mL/min；进样量：20μL；柱温:30℃；骆驼蓬碱激发波长λex=375nm，发射波长λem=470nm；去氢骆驼蓬碱激发波长λex=320nm，发射波长λem=420nm。骆驼蓬碱在0.20～412.00ng/mL内有良好的线性关系（n=7，r=0.9999）；去氢骆驼蓬碱在0.89～453.13ng/mL内有良好的线性关系（n=6，r=0.9999)。方法的专属性、精密度、准确度、稳定性均符合生物样品的分析方法要求。增量法和减量法测定探针体外回收率基本一致，体内外探针回收率随着灌流速度的增加而减小，探针的回收率与药物浓度无关，在连续取样20h内探针回收率稳定。复方骆驼蓬子水凝胶贴剂及其软膏经皮给药后，血液中骆驼蓬碱和去氢骆驼蓬碱在取样时间内含量极低，仅有个别点能够测出，不能表达给药后血液中的药代动力学特征。复方骆驼蓬子水凝胶贴剂和软膏经皮给药后皮肤中骆驼蓬碱的药动学参数：Cmax分别为24.27±1.98和8.27±0.65(μg/L)，Tmax分别为13.00和13.67±0.58(h)，MRT分别为11.58±0.07和10.86±0.11(h)，AUC(0-t)分别为151.25±8.10和87.43±1.77(μg·h/L)，AUC（0-∞）分别为164.26±14.11和152.19±6.57(μg·h/L)，其中Cmax、MRT、AUC(0-t)差异有统计学意义（P<0.05）。贴剂和软膏经皮给药后皮肤中去氢骆驼蓬碱的药动学参数：Cmax分别为80.25±9.80和60.88±3.68(μg/L)，Tmax分别为15.33±0.58和15.00(h)，MRT分别为14.03±0.17和13.07±0.30(h)，AUC(0-t)分别为285.25±31.65和148.13±18.29(μg·h/L)，AUC(0-∞)分别为315.25±37.27和150.21±19.19(μg·h/L)，其中 Cmax、MRT、AUC(0-t)、AUC(0-∞)差异有统计学意义（P<0.05）。
　　结论：复方骆驼蓬子水凝胶贴剂与其软膏均具有良好的抗炎镇痛作用及抗关节炎作用，且皮肤刺激性轻微，对于慢性炎症的作用复方骆驼蓬子水凝胶贴剂强于复方骆驼蓬子软膏。自制微透析探针性能稳定可用于体内经皮给药药动学研究。药动学研究结果说明，新制剂复方骆驼蓬子水凝胶贴剂给药后改变了原软膏药动学参数，水凝胶贴剂生物利用度更高，局部皮肤中药物浓度更大，维持时间更长，有望产生更好疗效。

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前言

1 复方骆驼蓬子水凝胶贴剂与软膏抗关节炎作用药效学研究

1.1 试验材料

1.1.1 试药与仪器

1.1.2 实验动物

1.2 方法与结果

1.2.1 给药剂量的确定

1.2.2 受试物的制备

1.2.3 复方骆驼蓬子水凝胶贴剂与软膏对小鼠二甲苯致耳肿胀的影响

1.2.4 复方骆驼蓬子水凝胶贴剂与软膏对角叉菜胶诱发大鼠足趾肿胀的影响

1.2.5 复方骆驼蓬子水凝胶贴剂与软膏对大鼠棉球肉芽肿的影响

1.2.6 复方骆驼蓬子水凝胶贴剂与软膏对醋酸所致小鼠疼痛的影响

1.2.7 复方骆驼蓬子水凝胶贴剂与软膏对佐剂性关节炎的治疗作用

1.2.8 复方骆驼蓬子水凝胶贴剂与软膏对家兔皮肤刺激性

1.3 讨论

1.3.1 抗关节炎实验动物模型的选择

1.3.2 对照组的设立

1.3.3 复方骆驼蓬子水凝胶贴剂和软膏剂的药效比较

2基于微透析-高效液相色谱法研究复方骆驼蓬子水凝胶贴剂大鼠皮肤药动学

2.1 试验材料

2.1.1 实验动物

2.1.2 试药与仪器

2.2 方法与结果

2.2.1溶液的配制

2.2.2 高效液相荧光检测器测定大鼠体内骆驼蓬碱与去氢骆驼蓬碱的方法

2.2.3 微透析探针的制作与评价

2.2.4 复方骆驼蓬子水凝胶贴剂和软膏的药动学研究

2.3 讨论

2.3.1 波长的选择

2.3.2 流动相的选择

2.3.3 灌流液的选择

2.3.4 探针流速的选择

2.3.5 微透析回收率的测定方法

2.3.6 经皮给药制剂皮肤药动学意义

2.3.7 骆驼蓬碱与去氢骆驼蓬碱的经皮给药皮肤药动学

2.3.8 展望

小结

致谢

参考文献

综述: 微透析技术在药物动力学上的应用

攻读硕士学位期间发表的学术论文

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