新疆石榴皮多酚主要成分在Caco-2细胞模型的吸收机制及初步药动学研究

摘要

目的：
　　1、建立了Caco-2细胞单层模型，并对细胞模型完整性进行评价。
　　2、通过Caco-2细胞模型对石榴皮多酚主要成分安石榴苷、鞣花酸的摄取特性进行考察。
　　3、通过 Caco-2细胞模型考察安石榴苷单体、鞣花酸单体及石榴皮多酚精制物的双向转运特性。
　　4、对新疆石榴皮多酚主要成分鞣花酸的初步药动学进行考察，为口服制剂的剂型设计和临床应用提供生物药剂学依据。
　　方法：
　　1、通过观察 Caco-2细胞形态学、测定跨膜电阻值（TEER）、标志物荧光素钠的渗漏检测，评价Caco-2细胞单层模型是否建立成功。
　　2、建立HPLC检测方法测定生物样品中石榴皮多酚主要成分安石榴苷和鞣花酸的含量，并进行方法学考察。
　　3、考察不同浓度、给药时间、温度、pH值、P-gp抑制剂对安石榴苷和鞣花酸在Caco-2细胞模型的摄取特性的影响。
　　4、考察对安石榴苷单体、鞣花酸单体及石榴皮多酚精制物在 Caco-2细胞模型的双向转运特性，采用HPLC测定含量，计算药物的累积转运量(Qr)、表观渗透系数（Papp）及外排比（RB-A/A-B），推测药物的吸收特性。
　　5、灌服给药后，考察新疆石榴皮多酚主要成分鞣花酸在大鼠体内的初步药动学，提取药动学参数。
　　结果：
　　1、光学倒置显微镜观察 Caco-2细胞形态结果显示，细胞间紧密排列，无缝隙；Caco-2单层细胞TEER值＞200.cm-2、标志物荧光素钠的Papp值为（2.38±0.57）×10-7cm.s-1，表明细胞完整性良好。
　　2、对建立的HPLC检测方法的专属性、线性、精密度、回收率和稳定性考察结果均符合实验要求。
　　3、安石榴苷和鞣花酸在 Caco-2细胞模型的摄取量呈时间依赖性；在一定浓度范围内二者的摄取量随着浓度增加近似呈线性增加；随着温度的升高，二者的在Caco-2细胞的摄取量随之增加；弱酸性环境不利于二者的摄取，中性或者弱碱性时药物的摄取量有所增加；加入p-gp抑制剂维拉帕米和环孢素后，药物的摄取量均有所增加。
　　4、安石榴苷单体、鞣花酸单体和及石榴皮多酚精制物在Caco-2细胞模型的双向转运考察结果表明，随着时间的增加药物的Qr值逐渐增大；均有高浓度药物 Papp值较低浓度 Papp值大，石榴皮多酚精制物的Papp值较单体化合物大；均有外排比（RB-A/A-B）＜1.5，表明药物双向转运无明显方向性；加入P-gp抑制剂维拉帕米和环孢素A后，药物双向转运的Papp值均增大，而加入螯合剂EGTA后，药物的Papp值有所下降；存在浓度差时，AP侧转运液在pH7.4时的双向转运Papp值均大于pH6.5的Papp值。
　　5、新疆石榴皮多酚主要成分鞣花酸的初步药代动力学研究结果表明，新疆石榴皮多酚主要成分鞣花酸和石榴皮多酚精制物在大鼠体内呈二室模型分布，主要药动学参数分别为T1/2a=（1.5±1.41）h，T1/2e=（4.78±2.32） h，Tmax=（0.8±0.00）h，Cmax=（10.33±7.48）μg.mL-1；T1/2a=（2.67±3.00）h，T1/2e=（2.92±1.00）h，Tmax=（0.2±0.00）h，Cmax=（13.73±6.64）μg.mL-1。
　　结论：
　　1、建立的Caco-2细胞模型评价指标符合要求，可满足药物后续吸收特性研究的要求。
　　2、建立的HPLC分析方法准确、灵敏、可靠，可用于摄取、转运和药动学样品的检测。
　　3、安石榴苷和鞣花酸的摄取特性均是主动转运，P-gp参与了其转运过程。
　　4、安石榴苷、鞣花酸和石榴皮多酚精制物在Caco-2细胞上的吸收行为，既有被动扩散也有主动转运，RB-A/A-B＜1.5，双向转运无明显方向性。5、大鼠灌服鞣花酸单体和石榴皮多酚精制物后，体内分布快，达峰时间较短。

目录

声明

中英文缩略词对照表

前言

研究方法与结果

1 实验材料

2 方法与结果

讨论

1 Caco-2细胞单层模型的建立及验证

2新疆石榴皮多酚主要成分在Caco-2细胞模型的摄取研究

小结

致谢

参考文献

综述:石榴抗肿瘤有效成分的研究进展

攻读硕士学位期间发表的学术论文

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