HK-Ⅱ调控mPTP减轻缺氧预处理中心肌细胞缺氧复氧损伤的研究

摘要

目的：探讨缺氧预处理发挥心肌保护作用的机制中是否通过缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）调控己糖激酶Ⅱ（HK-Ⅱ）减少线粒体膜通道转化孔（mPTP）的开放。
　　方法：原代乳鼠心肌细胞培养，建立缺氧/复氧损伤模型并实施缺氧预处理。贴壁72h后的心肌细胞随机分为6组；(1)对照组（CON）；(2)缺氧复氧组（H/R）；(3)缺氧预处理组（HPC）；(4)对照+HIF-1α抑制剂组（CON+YC-1）；(5)缺氧预处理+HIF-1α抑制剂组（HPC+YC-1）；(6)二甲基亚砜组（DMSO）。复氧结束后检测心肌细胞凋亡率、缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）、己糖激酶-Ⅱ（HK-Ⅱ）、细胞色素C（Cyt C）蛋白水平与线粒体膜电位。
　　结果：与CON组比较，H/R组和HPC+YC-1组细胞凋亡率升高，线粒体膜电位降低，HIF-1α、HK-Ⅱ和细胞色素c表达上调，HPC组HIF-1α和HK-Ⅱ表达上调（P＜0.05）。与H/R组比较，HPC组细胞凋亡率下降，线粒体膜电位升高，HPC组和HPC+YC-1组HIF-1α和HK-Ⅱ表达上调，细胞色素c表达下调（P＜0.05），HPC+YC-1组细胞凋亡率和线粒体膜电位差异无统计学意义（P>0.05）。与HPC组比较，HPC+YC-1组细胞凋亡率升高，线粒体膜电位降低，HIF-1α和HK-Ⅱ表达下调，细胞色素c表达上调（P＜0.05）。
　　结论：缺氧预处理对抗心肌细胞缺氧复氧损伤的机制中涉及HIF-1α调控HK-Ⅱ减少mPTP的开放，减少了心肌的损伤，表明稳定HIF-1α增加线粒体外膜上HK-Ⅱ能够增强缺氧预处理心肌保护的效果，这为临床提高提供了潜在的靶点。

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中文摘要

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前言

研究内容与方法

1 研究对象

1.1 设备

1.2 主要试剂

1.3 器械耗材

2 研究方法

2.1 实验试剂配置

2.2 乳鼠原代心肌细胞培养

2.3 缺氧/复氧模型制备

2.4 缺氧预处理模型制备

2.5 3-(5-羟基甲基-2-呋喃基)-1-苯基吲哚干预

2.6 免疫组化心肌细胞鉴定

2.7 细胞凋亡率检测

2.8 Western blotting

2.9 线粒体膜电位测定

3 实验分组

4 统计分析

结果

1 原代乳鼠心肌细胞实验

1.1 培养原代乳鼠心肌细胞存活的形态标志

1.2 培养原代乳鼠心肌细胞鉴定

1.2 心肌细胞凋亡率

1.3 心肌细胞膜电位

1.4 HIF-1α、HK-II和Cyt C蛋白表达

讨论

小结

致谢

参考文献

综述:缺氧诱导因子-1对缺氧损伤心肌的保护作用

攻读硕士学位期间发表的学术论文

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