PI3K/Akt信号通路与肝星状细胞活化的关系及其在放射性肝纤维化中的作用

摘要

目的：探讨PI3K/Akt信号通路与肝星状细胞（HSC）活化的关系及其在放射性肝纤维化中的作用。
　　方法：使用6MV X射线联合PI3K/Akt信号通路特异性抑制剂（Ly294002）处理HSC，分为空白对照组、抑制剂组、10Gy组、10Gy＋抑制剂组、20Gy组和20Gy＋抑制剂组。MTT法检测24、48、72、96h后细胞抑制率；流式细胞仪检测细胞凋亡率、ELISA法检测TGF-β1浓度、RT-PCR检测α-SMA、caspase-3、caspase-9的mRNA表达量、Western blot检测p-Akt的表达量。
　　结果：空白对照组细胞形态正常，随着照射剂量的增加细胞形态改变越明显，加入抑制剂后细胞形态改变减轻。MTT法显示：相同时间，随着照射剂量的增加抑制率也增加(F=40.421、319.196、128.928、270.54，P<0.05)。随着时间的延长，抑制率也增加。FCM法显示：与空白对照组相比，10Gy和20Gy组细胞的凋亡率随照射剂量的增加而增加（t＝8.43、11.63，P<0.05）；与10Gy和20Gy组比较，分别加抑制剂后细胞的凋亡率降低（t＝8.09、4.88，P<0.05）。与空白对照组相比，抑制剂组、10Gy组、10Gy＋抑制剂组、20Gy组、20Gy＋抑制剂组α-SMA、caspase-3、caspase-9的表达量差异具有统计学意义（F=67.942、56.503、10.069，P<0.05）。与10Gy照射组比较，20Gy组TGF-β1、α-SMA、p-Akt的表达量增加（t=6.91、7.80、9.28，P<0.05），10Gy＋抑制剂组在加入抑制剂后TGF-β1、α-SMA、p-Akt的表达量降低（t=6.17、15.11、10.34，P<0.05）。与20Gy组比较，20Gy＋抑制剂组在加入抑制剂后TGF-β1、α-SMA、p-Akt的表达量同样降低（t=10.04、6.85、23.84，P<0.05）。
　　结论：X射线通过激活PI3K/Akt信号通路使HSC活化，导致放射性肝纤维化的发生。抑制该通路后HSC的活化被抑制，放射性肝纤维化的发生降低。

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前言

内容与方法

1 材料

2 细胞培养

3 实验分组

4 实验方法

5 质量控制

6 统计方法

结果

1 各组细胞形态的观察：

2 MTT法检测细胞抑制率

3 FCM检测细胞凋亡率

4 ELISA法检测细胞上清液TGF-β1浓度

5 RT-PCR法检测α-SMA、caspase-3、caspase-9 mRNA的表达

6 Western blot法检测细胞p-Akt蛋白的表达

讨论

小结

致谢

参考文献

综述:肝星状细胞与纤维化的关系及主要的信号通路调控

攻读硕士学位期间获得的学术成果

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