JNK抑制剂SP600125调控体外培养牙囊细胞表达JNK/RANKL/OPG的初步研究

摘要

目的：观察在JNK抑制剂SP600125干预下牙囊细胞表达JNK,C-JUN, RANKL/OPG的特点，探究JNK在RANK/RANKL/OPG这条在牙囊向破骨细胞分化成熟过程中重要的信号途径之中的相关性作用。
　　方法：分离培养出生后5-6d的SD大鼠下颌第一磨牙牙囊细胞，CCK8检测SP600125对牙囊细胞活性的影响。PCR和Western Blot方法观察JNK，C-JUN，RANKL，OPG在体外培养牙囊细胞中的表达，SP600125对第四代牙囊细胞进行干预处理，观察JNK，C-JUN，RANKL，OPG在牙囊细胞内表达的相关变化。
　　结果：CCK8检测结果示：实验组牙囊细胞的增殖活力与对照组比较均无统计学意义（P>0.05），并且牙囊细胞的增殖活力也呈时间依赖性升高。PCR结果提示：JNKmRNA在实验组内比较均有意义（P<0.05），抑制剂浓度越大， JNKmRNA表达量越小。15umol/L实验组內，OPGmRNA表达量最高，在20umol/L组內，OPGmRNA表达量出现下降趋势（P<0.05）。实验组內RANKLmRNA表达量也有显著性差别（P<0.05），RANKLmRNA表达量随抑制剂浓度增高而降低。WB显示：JNK抑制剂浓度越高,实验组JNK，C-JUN磷酸化活性越低（P<0.05）。C-JUN在20umol/L组中蛋白表达量明显降低，几乎无表达。OPG的蛋白表达量在10umol/L时浓度达到最高，20umol/L组蛋白表达量较10umol/L组蛋白相比有下降趋势，但仍明显高于5umol/L（P<0.05）。在JNK抑制剂浓度5umol/L时，RANKL的蛋白表达量已开始出现下降趋势。
　　结论：在体外培养的牙囊细胞中，JNK信号通路被抑制后可使OPG含量升高RANKL含量降低，RANKL/OPG比值降低，可抑制破骨细胞的分化成熟。因此提示JNK信号通路在破骨细胞的分化成熟过程中可起到一定正向的调节作用。

目录

声明

中英文缩略词对照表

前言

研究内容与方法

1 研究对象

2 主要试剂及器材

3 研究方法

4 统计学方法

结果

1 牙囊细胞的培养

2 CCK8检测SP600125对牙囊细胞活性的影响

3 PCR 方法检测 SP600125 干预下体外培养牙囊细胞中JNK/RANKL/OPG的表达

4 Western Blot方法检测 SP600125干预下体外培养牙囊细胞中JNK/C-JUN/RANKL/OPG的表达

讨论

1 牙囊细胞的培养

2 JNK抑制剂SP600125对牙囊细胞活性的影响

3 JNK抑制剂SP600125干预下体外培养牙囊细胞中JNK/C-JUN/RANKL/OPG的表达

小结

致谢

参考文献

综述:JNK在牙囊细胞分化成破骨细胞机制中相关作用的研究进展

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