紫草素对Cx32组成的宫颈癌Hela细胞缝隙连接功能的影响

摘要

目的：在转染并稳定表达缝隙连接蛋白Cx32的宫颈癌Hela细胞上，观察紫草素对缝隙连接GJ功能和缝隙连接蛋白Cx32的表达水平的影响，以及对顺铂细胞毒性作用的影响。
　　方法：采用实时荧光定量PCR法和蛋白免疫印迹法对转染并稳定表达Cx32的Hela细胞系进行验证；CCK-8法测定用于研究GJ功能作用的紫草素浓度；用细胞接种荧光示踪法（Parachute assay）观察不同浓度紫草素对GJ功能的影响；用蛋白免疫印迹（Western-blot）法研究紫草素对缝隙连接蛋白Cx32的蛋白表达的影响。用标准集落形成法（standard colony-forming assay）测定紫草素对顺铂细胞毒性的影响。
　　结果：用多西环素培养的细胞有Cx32扩增，也有Cx32的表达，没有用多西环素的细胞没有Cx32扩增，也没有Cx32的表达；对于不用多西环素诱导的细胞，即无Cx表达时，紫草素4μM浓度以下对Hela细胞无毒性作用；用多西环素诱导的细胞，紫草素3μM浓度以下对Hela细胞无毒性作用；紫草素处理组细胞间荧光传递量在1-3μM随浓度的增加而增加；紫草素在（1-3μM）能浓度依赖性增强GJ功能及Cx32的表达。在有GJ形成时，3μM紫草素可以增强顺铂降低细胞集落形成率的作用。
　　结论：验证Cx32质粒转染成功，构建了可调控表达Cx32的细胞系。紫草素能增强Cx32组成的GJ功能。紫草素对GJ功能的增强作用与Cx32的表达有关。在有GJ形成的Hela细胞（生长融合），3μM紫草素可以增强顺铂的细胞毒性作用，有增敏的作用。在有GJ形成的Hela细胞（生长融合），紫草素可以增强顺铂的细胞毒性作用，具有增敏效果。

目录

声明

中英文缩略词对照表

前言

1.1 实验细胞

1.2 主要试剂

1.3 主要仪器和设备

1.4 主要实验制剂的配制方法

2.1 稳定表达Cx32的Hela细胞的构建

2.2 转染并稳定表达Cx32的Hela细胞的培养和验证

2.3 用于研究GJ功能作用的紫草素浓度的选择

2.4 紫草素对细胞GJ的作用

2.5 紫草素通过GJ对顺铂细胞毒性作用的影响

实验结果

1 转染了Cx32的Hela细胞的培养与验证

2 紫草素对Cx32组成的GJ功能及Cx32表达的影响

讨论

小结

致谢

参考文献

综述：细胞缝隙链接及紫草素药理作用

攻读硕士学位期间发表的学术论文

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