两种两色金鸡菊活性成分对胰岛细胞保护作用及小分子敲除初步探索

摘要

目的：⑴探讨两色金鸡菊黄酮成分马里苷对胰岛β细胞的保护作用及可能机制；⑵探讨雪菊多糖对胰岛β细胞的增殖活性和胰岛素分泌情况的影响；⑶合成并鉴定马里苷结构类似物柚皮苷的人工完全抗原，为制备柚皮苷的单克隆抗体及建立相应的免疫学分析方法敲除小分子柚皮苷奠定基础。
　　方法：①运用四甲基偶氮唑盐比色法（MTT）检测马里苷对MIN6细胞增殖的影响；酶联免疫法（ELISA）检测胰岛素分泌量；Western Blot方法检测细胞中BAX，Bcl-2蛋白表达水平；②运用四甲基偶氮唑盐比色法（MTT）检测雪菊多糖对MIN6细胞增殖的影响；酶联免疫法（ELISA）检测胰岛素分泌量；③采用过碘酸盐氧化法合成柚皮苷人工抗原；紫外光谱和薄层色谱法鉴定人工抗原偶联是否成功。
　　结果：⑴与正常对照组比较，高糖高脂模型组MIN6细胞存活率明显降低（P<0.05），不同浓度马里苷干预组MIN6细胞增殖均显著增加(P<0．05)。与正常对照组比较，高糖高脂模型组MIN6细胞胰岛素分泌量明显降低（P<0.05）；与高糖高脂模型组比较，马里苷给药组MIN6细胞胰岛素分泌量明显升高（P<0.05）。Western印迹显示，与正常对照组比较，BAX蛋白表达量模型组增多，给药组随浓度递增依次减少；Bcl-2蛋白相对模型组减少，给药组随浓度增加依次增多（P<0.05）；⑵与正常对照组比较，高糖高脂模型组细胞存活率明显降低（P<0.05），不同浓度雪菊多糖干预组MIN6细胞增殖均显著增加(P<0．05)。与正常对照组比较，高糖高脂模型组细胞胰岛素分泌量明显降低（P<0.05）；与高糖高脂模型组比较，给药组细胞胰岛素分泌量明显升高（P<0.05）；⑶紫外光谱图谱显示人工抗原偶联成功；薄层色谱法显示人工抗原偶联成功。
　　结论：①马里苷对高糖高脂造成的胰岛细胞损伤有保护作用，其可能机制可能与Bcl蛋白家族有关；②雪菊多糖可以逆转糖脂毒性对胰岛细胞的损伤；③成功合成了柚皮苷人工抗原，可用于下一步柚皮苷单克隆抗体制备及小分子敲除方法的建立。

目录

声明

中英文缩略词对照表

前言

1 两色金鸡菊黄酮成分马里苷对糖脂毒性损伤胰岛β 细胞的保护作用

1.1 实验材料

1.2 实验方法

1.3 实验结果

1.4 讨论

2 雪菊多糖对MIN6细胞增殖活性和胰岛素分泌情况的影响

2.1 实验材料

2.2 实验方法

2.3 实验结果

2.4 讨论

3 马里苷结构类似物柚皮苷人工抗原的合成与鉴定

3.1 实验材料

3.2 实验方法

3.3 实验结果

3.2.4 讨论

小结

致谢

参考文献

综述:小分子单克隆抗体的制备与敲除技术研究

攻读硕士学位期间发表的学术论文

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