食管癌微环境中M2型肿瘤相关巨噬细胞参与细胞恶性表型的调控机制研究

摘要

目的：本研究首先探讨了M2型肿瘤相关巨噬细胞（M2型TAMs）浸润与食管癌患者预后的相关性，并分析食管癌组织中M2型TAMs浸润的临床病理学意义。其次，通过构建M2型TAMs与食管癌细胞的体外共培养体系，探讨共培养对食管癌上皮间质转化（Epithelial-mesenchymal transition，EMT）及细胞增殖、迁移、侵袭能力的影响。最后，收集共培养上清，运用抗体芯片筛选共培养后差异表达的蛋白因子，研究M2型TAMs分泌的蛋白因子对食管癌细胞EMT及迁移、侵袭能力的影响，初步探讨M2型TAMs参与调控食管癌细胞恶性表型的相关分子机制。方法：1）Meta分析食管癌组织中M2型TAMs浸润的临床病理学意义；通过免疫组化（Immuno histo chemical，IHC）染色检测食管癌组织中M2型TAMs的浸润，分析M2型TAMs浸润与患者预后的相关性及M2型TAMs浸润的临床病理学意义；2）构建M2型TAMs与食管癌细胞共培养体系，观察共培养后食管癌细胞的形态学改变，运用qRT-PCR和Western-blot检测共培养后食管癌细胞EMT相关标志物的表达，通过细胞增殖试验（MTT Assay）、细胞迁移试验（Wound-healing Assay）、细胞侵袭试验（Transwell Assay）检测共培养对食管癌细胞增殖、迁移、侵袭能力的影响；3）抗体芯片筛选共培养后差异表达的蛋白因子，观察M2型TAMs所分泌的蛋白因子诱导对食管癌细胞形态学改变的影响，运用qRT-PCR和Western-blot检测蛋白因子诱导后食管癌细胞EMT相关标志物的表达，通过MTT试验、Wound-healing试验、Transwell试验分别检测蛋白因子诱导对食管癌细胞增殖、迁移、侵袭能力的影响，初步探讨M2型TAMs参与调控食管癌细胞恶性表型的相关分子机制。结果：1）Meta分析结果表明，M2型TAMs浸润与食管癌患者淋巴结转移、临床分期及T分期具有统计学相关性。免疫染色结果表明，食管癌及癌旁对照组织中均可见M2型TAMs浸润，M2型TAMs在食管癌中浸润密度明显高于癌旁组织，差异具有统计学意义（P＜0.05）。临床病理学分析表明，M2型TAMs浸润与食管癌患者淋巴结转移（P=0.018）和T分期（P=0.021）具有统计学相关性（P＜0.05），与患者年龄（P=0.862）、性别（P=0.249）、临床分期（P=0.563）、肿瘤直径（P=0.898）无统计学相关性（P＞0.05）；Kaplan-Meier（K-M）生存曲线分析表明， M2型TAMs浸润与食管癌患者预后呈现出负相关的趋势（P=0.000）；2）食管癌细胞与M2型TAMs共培养后发生形态学改变，qRT-PCR和Western-blot结果表明，共培养后食管癌细胞上皮标志物表达减少，而间质标志物表达增加。细胞功能学试验结果表明，共培养后食管癌细胞迁移、侵袭能力增强，而细胞增殖能力无明显改变；3）抗体芯片结果表明，M2型TAMs与食管癌细胞共培养后，IL-1β（上调829.43倍）和MCP2（上调808.41倍）表达明显增加，与非共培养组相比差异具有统计学意义（P＜0.05）。IL-1β和MCP2诱导后，食管癌细胞发生EMT，细胞迁移、侵袭能力明显增强，但IL-1β诱导后食管癌细胞增殖能力无明显改变。此外，Western-blot结果表明，IL-1β和MCP2诱导可激活NF-κB信号通路，使用NF-κB通路抑制剂（BAY11-7082）则可减弱NF-κB信号通路的磷酸化水平。结论：1）M2型TAMs在食管癌组织中的浸润密度明显高于癌旁对照组织，M2型TAMs浸润与患者预后及淋巴结转移、T分期具有统计学相关性；2）M2型TAMs与食管癌细胞共培养，可引起食管癌细胞发生EMT，增强食管癌细胞的迁移和侵袭能力；3）M2型TAMs分泌的IL-1β和MCP2，可引起食管癌细胞发生EMT，增强食管癌细胞的迁移和侵袭能力。M2型TAMs分泌的IL-1β和MCP2有可能通过激活NF-κB信号通路参与调控食管癌细胞的恶性表型。

目录

声明

中英文缩略词对照表

前言

1 食管癌

2 肿瘤微环境

3 M2型肿瘤相关巨噬细胞

4 上皮间质转化

5 本课题的研究意义

6 本课题的研究目标与研究内容

第一部分 M2型TAMs在食管癌中表达的Meta分析及与食管癌预后相关性的研究

1 研究内容与方法

2 结果

3 讨论

4 小结

第二部分 M2型肿瘤相关巨噬细胞在食管癌细胞系中作用的研究

1 研究内容和方法

2 结果

3 讨论

4 小结

第三部分 M2型TAMs分泌IL-1β和MCP2对食管癌侵袭、转移功能的影响及分子机制研究

1 研究内容和方法

2 结果

3 讨论

4 小结

全文总结

研究创新：

研究结果：

致谢

参考文献

综述:M2型肿瘤相关巨噬细胞的研究进展

攻读博士学位期间获得的学术成果

个人简历

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