脂肪干细胞复合异种膀胱脱细胞基质修复兔膀胱缺损的研究

摘要

目的:（1）研究探讨 CM-Dil 标记 rADSCs 的可行性，并观察标记后的 rADSCs与膀胱脱细胞基质共培养形成的细胞-支架复合物的荧光表达情况，保证移植细胞的质量及标记细胞的示踪效果；（2）评估细胞-支架复合物对于兔膀胱缺损模型的修补作用，观察并鉴定细胞-支架复合物修补处特异性标记物的表达。方法：取新西兰白兔双侧腹股沟处脂肪组织经过相应处理后得到原代rADSCs，进行成骨、成脂诱导染色及流式细胞术检测CD29、CD34、CD44、CD45对rADSCs进行鉴定，同时制备鼠BAM；用CM-Dil标记状态良好的P3代rADSCs，采用二次沉淀法将rADSCs静态接种于BAM表面，分别观察并评估细胞和细胞-支架复合物的荧光表达情况。手术回植细胞-支架复合物至兔膀胱缺损模型观察生长情况；分别于术后2、4、6、8周取得实验动物膀胱，选取修补位置，分别制成冰冻及石蜡切片，使用荧光倒置显微镜观察冰冻组织切片的荧光表达，利用免疫组化的方法检测组织结构成分和平滑肌细胞特异性标记物的表达。结果：（1）CM-Dil标记的第三代rADSCs荧光表达稳定，与大鼠BAM共培养得到的细胞-支架复合物仍有较强的荧光表达；（2）实验兔分别于术后7d、16d各死亡一只，死因为漏尿；组织切片荧光表达有所减弱但仍存在，与未修补位置界限较清，Masson染色发现组织结构齐全，肌纤维表达明显，免疫组化表达平滑肌细胞特异性标记物：a-SMA。 结论：（1）使用 CM-Dil 作为细胞的荧光标记的方法可行，体外及体内荧光表达水平均满意；（2）膀胱脱细胞基质BAM在实验兔体内8周后可基本吸收降解，是一种良好的生物支架材料，rADSCs在体内能够分化为平滑肌细胞。rADSCs和BAM采用静态接种的方法可在体外构建组织工程膀胱，修补缺损的兔膀胱效果良好，是一种理想的膀胱修补重建材料。

目录

声明

中英文缩略词对照表

前言

内容与方法

1 实验材料

2 研究内容及具体实验操作步骤

3质量管理

4统计学分析

5技术路线图

结果

1 rADSCs的形态学观察及鉴定

2 BAM的制备

3 细胞荧光标记及细胞支架复合物的构建

4 修复兔膀胱缺损模型

讨论

1 种子细胞的选取

2 膀胱支架材料的选择

3 CM-Dil的标记以及细胞-支架复合的构建

4修复兔膀胱缺损模型

小结

致谢

参考文献

综述:干细胞复合支架材料在组织工程膀胱中的研究进展

攻读硕士学位期间发表的学位论文

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