应用PCR法和LAMP法鉴定牛早期胚胎性别的研究

摘要

在畜牧业生产实践中，往往需要人为控制家畜的性别及比例，加速优良品种繁育，扩大优良母畜的利用率，因而，性别控制技术在畜牧生产上具有重要的意义。随着农业产业化的进程，特别是牛羊胚胎工程产业化的迅速发展，运用性别控制技术来加快这种产业化的进程显得越来越重要。本研究旨在通过用PCR法、LAMP法进行牛早期胚胎性别鉴定的研究和应用，从而确立可以在实际应用中被推广的性别控制方法，提高养殖场和农户的经济效益，进而推动新疆乃至全国养牛业的发展。本研究主要做了以下方面的研究：1.通过设计特异性引物，改变Mg2+浓度、退火温度、调整循环条件等影响PCR的因素，并且经过不同样品的验证，最终确定适合生产实践的PCR反应体系为：双重PCR反应体系总体积为25μl:2.5μl10×Buffer，1.5mMMg2+，0.2mMdNTP，2UTaqDNA聚合酶，性控引物浓度为0.4μM(P0)，内标引物浓度为0.15μM(P4)(性控和内标引物可单独加入同一反应液里)。94℃预变性5min，94℃30s，55℃30s，72℃30s；72℃延伸5min，33个循环。 巢式PCR第一次反应体系总体积为10μl：1μl10×Buffer，2.5mMMg2+，0.2mMdNTP，1UTaqDNA聚合酶，各引物浓度(P1，P5)为0.1uM。94℃预变性4min，94℃30s，63℃30s，72℃30s；72℃延伸2min，20个循环；第二次反应体系总体积为20μl，2μl10×Buffer，2.5mMMg2+，0.2mMdNTP，2UTaqDNA聚合酶，各引物浓度均为0.25μM。94℃预变性5min，94℃30s，63℃30s，72℃30s；72℃延伸5min，30个循环。 通过不同样品的试验和46枚胚胎现场的应用，证明建立的PCR胚胎性别鉴定方法可用于生产实践。 2.LAMP(Loop-mediatedisothermalamplification)法是一种新的基因扩增技术，具有简便、准确、灵敏、快速的特点；通过不同样品、现场126枚常规胚胎和42枚性控胚胎的鉴定，结果证明该方法可应用于牛早期胚胎性别鉴定。 3.PCR法和LAMP法所鉴定同一样品的结果是吻合的，说明在控制好实验条件的情况下，根据实际情况可选用这两种方法的任何一种进行牛早期胚胎的性别鉴定应用。

目录

文摘

英文文摘

独创性声明及关于学位论文使用授权的说明

第一部分文献综述

第一章性别决定机制与控制方法

第二章牛早期胚胎性别鉴定的方法

第二部分实验研究

实验一 PCR法鉴定牛早期胚胎性别的优化研究

实验二 LAMP牛胚胎性别鉴定试剂盒的应用研究

第三部分结论

参考文献

致谢

作者简历