哈密大枣、木纳格葡萄再生体系建立及遗传转化研究

摘要

冷/冻害是影响植物生长的重要非生物胁迫伤害。新疆是我国红枣和葡萄的主产区之一，而冻害在新疆时有发生，已成为制约新疆林果业发展的重要因素之一。利用转基因手段提高植物抗寒能力，培育转基因抗寒果树，可为解决新疆果树冻害提供新途径。
　　本研究建立了哈密大枣和木纳格葡萄不定芽再生体系，并通过根癌农杆菌介导CBF基因转化，获得哈密大枣和木纳格葡萄转基因植株。主要试验结果如下:
　　(1)以哈密大枣叶片为外植体，探讨了基本培养基、不同激素、暗培养时间等因素对不定芽再生的影响，建立了再生体系。结果表明，外植体经过10 mg/L Vc浸泡15 min之后，接种于以NN69为基本培养基并添加1 mg/L TDZ+0.2 mg/L IBA+1 mg/L AgNO3的培养基中，暗培养2周后转入光照培养30d，再将外植体转入MS+1 mg/L6-BA+0.2 mg/L IBA不定芽分化培养基中使不定芽进一步分化。不定芽生长至3cm以上时，转至0.4 mg/L IBA的1/2 MS培养基上进行诱导生根。
　　(2)以哈密大枣叶片为根癌农杆菌介导的受体材料，建立了适合哈密大枣叶片遗传转化的体系。结果表明，叶片浸染农杆菌前预培养2d，侵染菌液浓度为OD600为0.5，侵染时间为20 min，侵染后在共培养培养基NN69+ TDZ1 mg/L+ IBA0.2 mg/L中暗培养3d，转入筛选培养基NN69+ TDZ1mg/L+ IBA0.2 mg/L+AgNO31 mg/L+ Kan20 mg/L+ Cef300 mg/L中先暗培养9d后光照培养30d，之后转接到选择分化培养基MS+6-BA1 mg/L+ IBA0.2 mg/L+ Kan20mg/L+ Cef300 mg/L继续光照培养，光照周期为14h光照/10h黑暗。将CBF基因转入哈密大枣中，通过PCR检测初步确定有7株转基因阳性植株。
　　(3)以木纳格葡萄品种为材料，研究外植体类型、不同培养基、不同激素种类及浓度、暗培养时间对木纳格葡萄不定芽诱导的影响。结果表明，叶片、叶柄、茎段三种外植体诱导不定芽，只有叶片、叶柄能够诱导出不定芽。以叶柄为外植体在NN69+ TDZ1 mg/L+ IBA0.2 mg/L培养基上诱导率最好，为16.3％;以叶片为外植体在NN69+ TDZ4 mg/L+ IBA0.2 mg/L培养基上诱导率最好。不定芽转接到MS+6-BA1 mg/L+ IBA0.2 mg/L培养基上伸长培养效果更好。
　　(4)以木纳格葡萄叶片和叶柄为受体，通过农杆菌介导转化CBF基因。结果表明，叶片、叶柄Kan临界浓度为5 mg/L，Cef最适浓度为300 mg/L。在葡萄遗传转化后，采用延迟筛选，起始浓度为2.5 mg/L逐步增加到5 mg/L，可减少对再生的抑制。采用此体系对‘木纳格’葡萄进行转化，共获得12株抗性植株，PCR检测结果表明，5株PCR呈阳性，初步证实CBF基因整合到木纳格葡萄基因组。

目录

声明

论文说明

摘要

常用缩略语中英文对照表

第1章 绪论

1．1 枣树离体培养的研究进展

1．2 葡萄再生体系研究进展

1．3 果树遗传转化的研究进展

1．4 影响农杆菌遗传转化的因素

1．5 植物转录因子CBF及其遗传转化研究进展

1．6 本研究的目的和意义

第2章 哈密大枣离体叶片不定芽再生体系建立

2．1 材料

2．2 试验方法

2．3 结果与分析

2．4 讨论

2．5 小结

第3章 农杆菌介导哈密大枣遗传转化研究

3．1 材料

3．2 试验方法

3．3 结果与分析

3．4 讨论

3．5 小结

第4章 木纳格葡萄植株再生体系的建立

4．1 材料与方法

4．2 结果与分析

4．3 讨论

4．4 小结

第5章 农杆菌介导CBF基因转化木纳格葡萄研究

5．1 材料与方法

5．2 结果与分析

5．3 讨论

5．4 小结

第6章 结论

参考文献

致谢