布鲁氏菌omp31、omp2b基因重组山羊痘病毒的构建及免疫原性初步研究

摘要

布鲁氏菌病（Brucellosis）是由胞内寄生的革兰氏阴性菌布鲁氏菌引起的一种人畜共患病，主要引起家畜死胎、流产、不孕等症状，不仅影响畜牧业的发展，还可导致巨大的经济损失和严重的公共卫生问题。本研究以我国广泛使用的山羊痘弱毒疫苗株为亲本病毒，构建含布鲁氏菌保护性抗原omp31和omp2b的重组山羊痘病毒，以期获得针对布鲁氏菌病的免疫性强的重组羊痘病毒，为布鲁氏菌病、羊痘的预防提供理论基础。 根据GenBank登录的羊种布鲁氏菌omp31和omp2b基因序列，分别设计引物，PCR扩增得到omp31和omp2b基因，酶切、测序鉴定其正确性。将鉴定正确的omp31和omp2b基因克隆到GTPV（Goat poxvirus）重组载体pGM-TK-P11-GPT1上，构建含有布鲁氏菌omp31和omp2b基因的重组山羊痘病毒转移载体。将构建好的这两个山羊痘病毒转移载体与GTPV疫苗株G14-STV44-55共转染绵羊睾丸细胞，筛选、鉴定重组病毒rGTPV株，并对该重组病毒的细胞裂解物表达的OMP31和OMP2b蛋白进行Western blot检测，利用间接ELISA来检测rGTPV株免疫小鼠后其体内IgG抗体水平。 本实验获得了稳定表达布鲁氏菌OMP31和OMP2b蛋白的重组山羊痘病毒株G14-STV44-55-BOMP31和G14-STV44-55-BOMP2b；Western blot检测表明重组山羊痘病毒表达的OMP31和OMP2b蛋白具有免疫反应性；rGTPV株免疫小鼠试验表明该重组病毒表达的OMP31和OMP2b蛋白能产生相应的抗体，具有一定的免疫原性。本实验为进一步开展GTPV活载体疫苗的研制及相关基础研究提供了技术平台。

目录

文摘

英文文摘

前言

论文说明：英文缩略词表

声明

第一章文献综述

综述一重组羊痘病毒载体的研究进展

综述二布鲁氏菌疫苗的研究进展

第二章实验研究

实验一布鲁氏菌omp31、omp2b基因重组山羊痘病毒的构建

1.材料与方法

2.结果

3.讨论

实验二布鲁氏菌omp31、omp2b基因重组山羊痘病毒的免疫原性初步研究

1.材料与方法

2.结果

3.讨论

结论

参考文献

附录

致谢

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