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新疆部分地区奶牛戊型肝炎血清流行病学调查及病毒的基因型研究

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前言

第一章文献综述

1.病原学

2.基因组结构

3.基因型

4.流行病学

4.1流行概况

4.2传染源

4.3传播途径

4.4易感及高危人群

4.5流行特征

5.检测方法

5.1病毒检测

5.2病毒抗体的检测

6.细胞培养

7.牛戊型肝炎的流行病学

8.HEV研究存在的问题以及本课题解决的问题和意义

第二章实验研究

试验一新疆部分地区奶牛戊型肝炎血清流行病学调查

1材料与方法

2结果

3讨论

试验二新疆奶牛源戊型肝炎病毒RNA检测及序列分析

1材料与方法

2结果

3讨论

结论

创新点

参考文献

附录本实验所获HEV分离株GenBank登陆情况

致谢

作者简介

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摘要

1.本研究于2007年11月与2008年6月采集新疆13个地区奶牛血清1100份,应用双抗原夹心酶联免疫法(DS-ELISA)检测抗戊型肝炎病毒(HEV)抗体,比较不同时间段、不同地区以及不同年龄段奶牛HEV抗体阳性率的差异.结果显示,所检测奶牛血清中HEV抗体阳性率为3.64% (40/1100),2007年11月与2008年6月奶牛HEV抗体阳性率分别为5.78% (39/675)和0.24% (1/425),差异极其显著(P<0.01).南、北疆奶牛HEV抗体阳性率分别为2.45% (7/286)和4.05% (33/814),差异极其显著(P<0.01).2岁以内(包含2岁)、2~4岁(包含4岁)、4岁以上奶牛的HEV抗体阳性率分别为0%(0/175)、4.01%(20/499)、4.59%(20/436),差异显著(P<0.05)。表明新疆地区奶牛HEV感染普遍存在,抗体阳性率年龄有一定的相关性。 2.从戊型肝炎病毒(Hepatitis E virus,HEV)抗体检测阳性的新疆两个奶牛场分别采集牛粪便或肛拭予样品,利用反转录套式聚合酶链式反应(RT-nPCR)检测HEV RNA,结果第一奶牛场7份为阳性,阳性率11.67% (7/60),第二奶牛场1份为阳性,阳性率为3.23% (1/31)。将PCR扩增产物克隆后测序,结果表明,8株牛源HEV分离株在HEVORF2 189bp核苷酸序列的同源性为96.8%-100.0%,为同一基因型;与HEV Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ的同源性分别为80.7%-89.1%,80.8%-85.6%,78.2%-87.7%和83.4%-96.9%,与Ⅳ亚型的同源性同源性最高达92.2%-96.9%。以该核苷酸片段绘制的基因进化树显示8株牛源HEV与人源HEV Ⅳ型C5株和猪源swC3、swXJ株在同一分支上,属基因Ⅳ型,提示新疆奶牛存在HEV的感染,并且其可能是除猪外人类HEV传染源的新宿主。

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