椒样薄荷病毒种类的分子鉴定及检测研究

摘要

椒样薄荷是新疆的一种香料植物，随着种植年限的增加，椒样薄荷精油品质和产量逐渐下降。本实验对椒样薄荷病毒进行了分子鉴定，并建立相应的检测方法，为椒样薄荷无毒化栽培及生产提供理论基础。
　　从田间采集表现明显病毒症状的椒样薄荷病株，采用纤维素（CF-11）层析方法，对椒样薄荷植株中的病毒dsRNA进行分离，利用改进的单引物法扩增到一段约400bp产物，然后对其进行克隆与测序。得到该片段核苷酸序列为352bp，序列分析表明为黄瓜花叶病毒（CMV）1a基因的部分序列，与其它已报道CMV1a基因序列同源性高达96％。
　　根据所获病毒信息，设计了3对针对CMV2a基因、2b基因和CP基因特异性引物，对病株进行了相应目标基因的RT-PCR，结果均扩增到预期的目标片段。利用间接ELISA从186个样品中检测出3个样品呈阳性。并利用免疫反转录PCR（IC-RT-PCR）从分离物MP1中检测到CMV，通过体系优化，建立了针对CMV的IC-RT-PCR检测体系，该体系病毒粗提液的稀释限点为10-6。
　　根据CMVRNA3基因组全长设计特异引物从分离物MP1中扩增到目标片段，将其进行克隆和测序，得到2189个核苷酸，序列分析表明，该序列与其它已报道CMVRNA3组分核苷酸序列同源性达到90%以上；包含2个分别编码3a基因和CP基因的开放阅读框。3a基因为838个核苷酸，编码一个由279个氨基酸组成的蛋白质（分子量为30.6kDa），与其它已报道CMV的RNA核苷酸同源性为93.4%～96.9%，氨基酸同源性为95.4%～99.1%。CP基因为657个核苷酸，编码一个由218个氨基酸组成的蛋白质（分子量为24kDa），与其它已报道CMV的RNA核苷酸同源性为93.9%～96.8%，氨基酸同源性为97.7%～99.1%。基于CMV基因组RNA3上的3a基因和CP基因构建系统关系树，来自伊犁椒样薄荷的CMV与来自福建的PE分离物关系最近，位于同一个进化分支。

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英文缩略词及中文对照

引 言

第一章 文献综述

1.1椒样薄荷分类地位及分布

1.2 椒样薄荷的经济价值

1.3 薄荷属病毒病的研究现状

第二章 椒样薄荷病毒种类的dsRNA分离与鉴定

2.1 材料和试剂

2.2 试验方法与步骤

2.3 结果与分析

2.4结论与讨论

第三章 椒样薄荷病毒病检测研究

3.1 材料和试剂

3.2 试验方法

3.3结果与分析

3.4结论与讨论

第四章 椒样薄荷MP1分离物的RNA3基因组的克隆及其分析

4.1 材料和试剂

4.2 试验方法

4.3 结果与分析

4.4 结论与讨论

全文小结

参考文献

附录一：椒样薄荷分离物MP1的 RNA3基因组序列

附录二：主要溶液配制

致谢

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