新疆维吾尔、汉族TLR9 SNPs与HBV基因型的相关性研究

摘要

目的：研究新疆地区维吾尔族、汉族HBV基因型差异较大的C型和D型与其TLR9位点单核苷酸多态性（SNPs）的相关性，借此了解HBV基因型的遗传易感性和先天性免疫机制的关系，为不同民族、不同HBV基因型肝炎的预防和治疗提供理论依据。
　　方法：1.从新疆维吾尔族、汉族慢性HBV感染者血清中提取病毒DNA，采用实时荧光标记PCR法对其HBVDNA载量进行定量检测。2.应用PCR结合反向斑点杂交法（PCR-RDB）对HBVDNA阳性者进行HBV基因型分型。3.使用PCR结合单链构象多态性（SSCP）技术对HBV基因型分别为C型和D型的维、汉族慢性HBV感染者的TLR9基因进行单核苷酸多态性（SNP）分析，并以基因测序法予以验证。4.统计学方法:1).HBVDNA定量结果转换为常用对数值，定量资料用均数±标准误（x±）表示。2).采用SxSPSS16.0统计软件对所得数据进行分析。
　　结果：1.在905例慢性HBV感染者中，维吾尔族369例，包括男210例，女159例。汉族536例，其中男327例，女209例。此样本HBVDNA定量检测显示，高、中、低拷贝组中维族与汉族在人数分布中差异均有统计学意义（P＜0.05）；维、汉族慢性HBV感染者HBVDNA拷贝数存在男女差别，但差异无统计学意义(P＞0.05)；维、汉族HBVDNA载量在1-10岁组高于其他年龄段,而且在40岁之前，维、汉族的HBVDNA载量都有随年龄的增大而呈降低趋势。2.成功分型504例样本，维族260例，D型219例（84.23％），C型19例（7.31%），维族D型以绝对优势显著高于其他型别基因型。汉族244例，C型128例（52.46%），D型33例（13.52%），汉族以C型为主。3.TLR9SNP在1174、2848位点发现多态性，1174位点AB基因型，其碱基序列第一位碱基处出现G→T突变，BB基因型111位碱基出现C→T的突变；2848位点DD基因型，第71号碱基发生A→G的突变。汉族HBV慢性感染者与其对照组相比TLR91174、2848位点基因型频率分布差异有统计学意义（χ2=7.34，P＜0.05；χ2=4.56，P＜0.05)，在HBVC基因型上两民族TLR91174、2848位点基因型频率的分布差异有统计学意义(χ2=7.05，P＜0.05；χ2=10.23，P＜0.05)。
　　结论：1.新疆维、汉族HBVDNA载量1-10岁组高于其他年龄段,40岁之前随年龄增大而降低；基因拷贝数有高、中、低分布差异；两民族HBVDNA载量性别间差异无统计学意义。2.新疆维族HBVD基因型占绝对优势，汉族以HBVC基因型为主，形成了本地区独有的构成特点，是我国一个十分特殊的HBV基因型分布带。3.新疆维汉族慢性HBV感染者TLR9SNP在-1486、-1237位点未发现多态性，1174、2848位点有多态。慢性HBV感染可能与1174、2848位点突变有关，维汉族HBVC基因型感染可能与1174、2848位点突变有关。

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前 言

第一章 实时荧光定量PCR法测定HBV DNA病毒载量

1.材料

2.实验原理

3．主要实验方法

4. 结果分析与判定

5.结果

6.讨论

第二章 PCR反向斑点杂交法(PCR-RDB)检测HBV基因型

1.材料

2.实验原理

3．主要实验方法

4.结果

5.讨论

第三章 PCR-SSCP法分析TLR9基因单核苷酸多态性（SNP）

1.材料

2.实验原理

3.主要实验方法

4 结果与分析

5.讨论

结论

创新

参考文献

文献综述

1.TLRs家族成员的结构及分布特点

2.TLRs家族的配体

3．TLRs信号转导通路

4.TLRs与病毒性肝炎的相关性

5.问题与展望

参考文献：

附录

致谢

作 者 简 介

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