NT-3联合NSC移植治疗缺血缺氧性脑损伤乳鼠的病理研究

摘要

目的:探讨NT-3能否促进神经干细胞增殖和分化,及NT-3联合NSC移植对HIBD的神经功能恢复的治疗效果。
　　方法:取雌性Wistar孕鼠的胎鼠脑组织,行神经干细胞的体外培养、传代、鉴定,确定是神经干细胞后,将培养好的神经干细胞制成单细胞悬液,等待移植用。将wistar乳鼠78只采用随机数字表法将其分成四组:正常组、HIBD组、单纯NSC移植组、NT-3联合移植组。出生7日后采用左侧颈总动脉结扎+缺氧2小时的方法制备HIBD模型,造模后3日行神经干细胞侧脑室移植,正常组乳鼠不给予任何干预,后三组分别给予生理盐水、单纯NSCs、NT-3联合NSCs。移植后继续喂养,分别于4周、8周时行平衡木实验,后断头取脑,制作石蜡切片,行HE染色以及免疫组化,同时取材行电镜检查。
　　结果:体外培养胎脑组织可见悬浮生长的圆球形或不规则球形细胞团,Nestin染色阳性,提示其为神经干细胞。行为学观察HIBD鼠在通过平衡木横杆时迟疑不定,探索行为较多,下肢关节活动僵硬,协调能力较差;而神经干细胞移植组较HIBD组关节活动恢复明显,协调性也有所改善,NT-3组活动恢复更加显著。统计数据显示:NT-3组与NSC组比较(P<0.05)有统计学意义。形态学观察HE染色HIBD组脑室旁正常组织破坏严重,并可见多个不规则囊腔,NSC移植组和NT-3联合移植组脑室旁正常组织结构均有所恢复,囊变少见。免疫组织化学提示NT-3联合组可见MBP阳性细胞明显增多,细胞排列结构明显改善。高倍镜下观察MBP染色的阳性细胞数各组分别为14.83±2.44个、3.13±0.39个、7.04±0.93个、12.87±1.19个,经统计学分析结果:NT-3组与NSC组比较(P<0.05)有统计学意义。而GFAP染色NT-3组阳性细胞明显减少,与NSC组比较统计学依然有明显差异;电镜下从细胞水平观察,超微结构明显好转,髓鞘纤维排列明显改善,细胞器排列稍欠规则,较单纯NSC移植组也有明显的改善。
　　结论:NT-3能够通过促进神经干细胞的增殖并诱导神经干细胞向少突胶质细胞分化作用,能有效促进乳鼠缺血缺氧性脑损伤的功能恢复。

目录

封面

声明

目录

中文摘要

英文摘要

英文缩略语表

前 言

材料和方法

1. 实验材料

2. 实验方法和步骤

3. 统计学方法

4. 实验流程图

结 果

1. HIBD模型制作情况

2. HIBD模型制作评价

3. 胎鼠脑源性神经干细胞的体外培养及鉴定

4. 行为学观察结果

5．形态学评价

6. 附图：图3模型制作

讨 论

1．神经干细胞培养及鉴定

2．HIBD模型的建立

3．神经营养因子对NSC的促进增殖及诱导定向分化

4．NT-3联合NSC移植更能促进HIBD鼠神经功能恢复

5．问题与展望

结 论

参考文献

文献综述

作 者 简 介

致谢

石河子大学硕士研究生学位论文