胶质瘤IDH1基因变异与胶质瘤大小及肿瘤细胞增殖的研究

摘要

目的：检测人胶质瘤标本的IDH1变异情况，同时建立稳定的人胶质瘤动物模型，不同时间点通过对肿瘤大小的观察、微血管测定、抗原Ki-67检测来初步探讨胶质瘤IDH1基因变异对胶质瘤大小及肿瘤细胞增殖的影响，为进一步的临床应用打下坚实的基础。
　　方法：收集新疆维吾尔自治区人民医院神经外科经外科手术切除并病理报告确诊胶质瘤的肿瘤标本，PCR方法检测 IDH1基因变异及免疫组化法检测微血管测定（MVD）、抗原Ki-67表达情况，变异及未变异的胶质瘤标本细胞培养传代，采用立体定向仪，将自行培养的胶质瘤细胞接种于成年雄性Wistar大鼠脑内的方法，制作鼠人脑胶质瘤模型。采用随机数表将120只雄性wistar大鼠随机分为手术组60只、假手术组30只、空白组30只，手术组又分为两组各30只，分别移植变异型人脑胶质瘤细胞和野生型人脑胶质瘤细胞，假手术组移植等量生理盐水，空白对照组给予常规饲养。小鼠均正常饲养，造模后的1W、2W、3W行影像学检查并记录肿瘤大小，3周后将各组大鼠处死取脑，行常规H E染色、胶质纤维酸性蛋白( GFAP)免疫荧光染色、微血管测定（MVD）及抗原Ki-67检测。
　　结果：
　　1.动物实验表明变异型胶质瘤组肿瘤大小与未变异组比较无统计学差异，分别为197.55±18.84和205.51±20.84，且生长速度也无差异；IDH1基因变异型胶质瘤组 Ki-67蛋白表达较未变异组胶质瘤降低，差异有统计学意义（P<0.05），IDH1基因变异型胶质瘤血管密度计数（MVD）较未变异组减低（P<0.05），表明 IDH1基因变异可降低肿瘤的增殖活性。
　　2.人体标本实验表明IDH1基因变异型胶质瘤 Ki-67蛋白表达较野生型胶质瘤降低，差异有统计学意义（t=2.134，P=0.039），IDH1变异型与野生型胶质瘤Ki-67标记指数分别为（14.44％±8.23%）和（21.19%±11.49%）；IDH1基因变异型胶质瘤血管密度计数（MVD）较野生型减低（t=2.328，P=0.025），其血管密度计数分别为31.11±13.47和40.54±12.11；低级别胶质瘤Ki-67及微血管密度（MVD）表达较高级别胶质瘤低（t=9.138，P<0.001；t=-8.369，P<0.001），低级别胶质瘤（WHO I级、II级）和高级别胶质瘤（WHO III级、IV级）Ki-67表达分别是8.36%±2.84%和25.55%±7.53%，其血管密度计数分别为23.94±8.03和45.54±8.19，两者表达随胶质瘤级别增高而增高，动物实验与人体肿瘤标本实验检测结果基本一致。
　　结论：胶质瘤IDH1基因变异对肿瘤生长及大小无明显影响，但其对肿瘤细胞的增殖有影响。因为IDH1基因变异影响肿瘤的能量代谢，而能量代谢受阻降低细胞的增殖活性，使大量细胞处于休眠期，导致新生血管内皮细胞分裂缓慢，新生肿瘤血管数量减低，恶变和转移受到抑制，为IDH1基因变异延长患者的生存期的机制提供新的理论依据。

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英文缩略词表

前言

1.准备

1.1实验标本收集

1.2实验动物及场地

1.3仪器和试剂

1.4基因检测

1.5免疫组化检测

2. 细胞复苏培养及传代

2.1细胞培养前准备

2.2细胞复苏及传代

3.模型制作

3.1接种准备及接种方法

3.2接种后处理

4.结果判定

4.1 影像学检查

4.2 免疫组织化学检查

5.统计学分析

结果

1.人胶质瘤标本IDH1基因变异情况

2.影像学检测结果

3.免疫组化检测结果

讨论

结论

参考文献

文 献 综 述

附录

致谢

作 者 简 介

石河子大学硕士研究生学位论文导师评阅表