杜泊羊和湖羊及其杂交后代MHC-DRB1外显子2多态性分析

摘要

绵羊主要组织相容性复合体（Major histocompitibility complex，MHC）又称为绵羊淋巴细胞表面抗原（Ovine Lymphocyte Antigen，OLA），是由紧密连锁、高度多态的基因位点组成染色体上的一个遗传区域，包含三个基因区域：Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ。它们所编码的蛋白称为MHC抗原或MHC分子，在抗原呈递、引发免疫反应和免疫调节中发挥重要作用。而且MHC与许多动物疾病的抗性、易感性、免疫应答以及生产性能都有密切关系。目前绵羊MHC的多态性主要集中在MHCⅡ类分子的DR和DQ基因座，DR所编码抗原功能区（抗原结合区）的第2外显子具有多态性。已成为分子免疫遗传领域的研究热点之一。
　　本研究应用PCR-RFLP方法，对杜泊羊和湖羊以及杜泊-湖羊杂交后代(杜-湖F1)OLA-DRB1基因外显子2的遗传多态性进行检测，分析了其多态性与支原体肺炎易感性的关联性，目的是为今后绵羊抗病育种工作奠定基础。本文主要结论如下：
　　1.应用PCR-RFLP方法，对403只湖羊、283只杜泊羊和125只杜泊-湖羊杂交一代的MHC-DRB1基因外显子2进行了遗传多态性检测，结果显示，MHC-DRB1基因第二外显子在SacⅡ、SacⅠ、Hin1Ⅰ、Mval和HaeⅢ5个酶切位点在3个绵羊群体存在丰富的多态性。湖羊共出现15个等位基因，26种基因型；杜泊羊共发现14个等位基因，25种基因型，杂交一代中共出现14个等位基因，23种基因型。
　　2.用x2适合性检验对三个群体MHC-DRB1基因外显子2是否处于hardy-weinberg平衡状态进行了检测。结果显示：杜泊羊，湖羊和杜-湖F1代在SacⅡ、SacⅠ、Hin1Ⅰ、Mval、HaeⅢ5个位点均未达到hardy-weinberg平衡状态。
　　3. MHC-DRB1等位基因和基因型的χ2检验结果表明：湖羊中HaeⅢee(P<0.01)和Mval bb(P<0.01)基因型较多，由于湖羊对支原体肺炎易感，提示基因型HaeⅢee和Mval bb是支原体肺炎的易感基因型。而HaeⅢ dd(P<0.01)和Mval cc(P<0.01)、多见于杜泊羊和杜-湖F1，而杜泊羊及其杂交后代的对本病有一定抵抗力，所以推测基因型HaeⅢdd和Mval cc是支原体肺炎的抗性基因型。以上基因型与支原体肺炎的易感性和抗性关系还需要进行攻毒等试验加以验证。对其余的基因型频率差异不显著或不具有统计学意义。
　　4.结合相关资料，对7个绵羊群体的MHC-DRB1基因外显子2的遗传分析表明：MHC-DRB1基因在7个绵羊群体中均有丰富多态性。根据MHC-DRB1外显子2基因频率进行遗传进化分析。结果显示：湖羊与哈萨克羊、中国美利奴羊（新疆军垦型）、多浪羊以及哈萨克羊与中国美利奴羊杂交一代群体的遗传距离较远；与杜泊羊及其杂交后代遗传距离更远，说明湖羊与杜泊羊及其杂交后代MHC-DRB1基因存在较大差异，这种差异可能与其疾病抗性、易感性有关。

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英文缩略表

前言

第一篇 文献综述 MHC研究进展

1. MHC概述

2. MHC的分子生物学功能

3. MHC多态性的研究方法

4. MHC的应用

5. MHC基因研究的目的和意义

第二章 实验研究

实验一：湖羊MHC-DRB1基因外显子2多态性分析

1. 材料和方法

2. 结果

3 讨论与小结

实验二：杜泊羊和杜泊-湖羊杂交一代MHC-DRB1基因外显子2的多态性分析

1.材料与方法

2. 结果

3.讨论与小结

实验三：7个绵羊群体MHC-DRB1基因外显子2多态性的遗传分析

1.材料与方法

2.结果和分析

3.讨论

全文结论

参考文献

附录 常用溶液和试剂的配制

1.常用溶液的配制

2.常用试剂的配制

3. 克隆中的试剂和培养基的配制

致谢

作者简介

石河子大学硕士研究生学位论文导师评阅表