不同绵羊品种的leptin基因多态性检测及分析

摘要

本实验是以104头常年发情的湖羊和90头季节性发情的阿勒泰羊,两个绵羊品种为主要研究对象。利用PCR-SSCP技术对两个品种绵羊的leptin基因多态性进行检测,并对筛查到的leptin基因位点多态性与绵羊季节性发情进行相关分析。结果如下:
　　在Leptin外显子2扩增片段上检测到AA、AB、BB三种SSCP基因型,BB基因型在阿勒泰羊群体中属于优势基因型,而AA基因型在湖羊中属于优势基因型。对两个群体进行基因型频率独立性χ2检验,差异极显著(P<0.001),说明BB基因型是影响季节性发情的有利基因型,并且该位点基因型分布处于Hardy-Weinberg平衡。在leptin外显子3扩增片段上检测的到CC、CD、DD三种SSCP基因型。CC基因型在湖羊上是优势基因型,并且未检测到DD基因型。对两个群体进行基因型频率独立性χ2检验,差异显著(P<0.01),该位点基因型分布处于Hardy-Weinberg平衡。
　　DNA测序结果表明,与湖羊相比,在阿勒泰羊leptin基因第一内含子上发现有三个连续碱基TTG的插入和C/T碱基突变;而第三外显子上发生G/T碱基突变,编码氨基酸由缬氨酸变成亮氨酸。
　　Leptin基因多态性与季节性发情进行各指标相关分析得出:绵羊品种中leptin基因序列的差异性与绵羊季节性发情相关,可能是造成绵羊季节性发情的原因之一,可作为常年发情绵羊品种选育的辅助标记。

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文献综述

1.Leptin的研究进展

1.1 ob基因的发现和起源

1.2 Leptin的结构

1.3 Leptin受体

1.4 Leptin基因的生物学功能

1.5 Leptin与绵羊季节性繁殖的相关联系

1.6 Leptin在畜牧业的应用前景

2.湖羊和阿勒泰羊品种资源的简介

2.1 常年发情绵羊品种——湖羊

2.2 季节性发情绵羊品种——阿勒泰羊

3.SNP与PCR-SSCP技术

3.1 SNP的概念及存在形式

3.2 SNP检测方法与手段

3.3 PCR-SSCP技术原理

3.4 PCR-SSCP技术发展历程

3.5 PCR-SSCP技术的应用

4.研究目的和意义

第一章 绵羊Leptin基因第二、三外显子PCR-SSCP检测及序列分析

1.材料与方法

1.1实验动物

1.2实验试剂

1.3实验仪器

1.4实验方法

1.5数据处理及方法

2.结果与分析

2.1PCR产物检测

2.2 SSCP检测及电泳结果分析

2.3基因型频率和等位基因频率的统计和分析

第二章 绵羊Leptin基因多态性及其绵羊季节性发情的相关分析

1.材料与方法

1.1实验材料

1.2数据处理方法和分析软件

2.结果和分析

2.1基因频率和等位基因频率差异性分析

2.2两个绵羊群体leptin基因遗传特性分析

2.3氨基酸理化性质分析

2.4蛋白三维结构比对分析

3.讨论

全文结论

参考文献

附录Ⅰ 主要仪器设备

附录Ⅱ 试剂配制

致谢

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