基质蛋白Fibulin-5在眼眶IgG4相关性疾病中的表达

摘要

目的：
　　探讨基质蛋白Fibulin-5与眼眶IgG4相关性疾病纤维化、炎症、硬化的关系。
　　方法：
　　选取2014年3月至2016年6月在解放军第474医院收治的患者因眼眶IgG4相关性疾病（IgG4-related disease、IgG4-RD）（眼眶泪腺肿物摘除术中采集）的泪腺组织标本20例20眼（IgG4-ROD组），收集同期的20例20眼正常的泪腺组织标本（眼眶开放性粉碎性骨折清创术中采集）作为对照组。所有患者术前均未接受免疫和化学治疗，且在年龄方面具有可比性（P>0.05）。在获得医院伦理委员会同意并取得患者的知情同意后,在术中所有组织均在行眼眶泪腺肿物摘除中留取。把泪腺组织标本分为大小均为约0.3cm×0.3cm×0.3cm三块，生理盐水充分冲洗干净。取一块组织放入4％多聚甲醛固定24h，然后取出放入自动组织脱水机，随后用石蜡包埋，制成蜡块备用，另外两块放入锡箔纸包裹和装有Trizol EP管中，放入-80℃冰箱保存备用。对经-80℃冰箱冻存的标本采用实时荧光定量PCR检测Fibulin-5及mRAN表达和采用Western blot法检测Fibulin-5及蛋白表达，数据采用SPSS19.0统计软件进行统计学分析，数据资料经Shapiro-Wilk检验呈正态分布，结果进行t检验，均数±标准差（-X±s）表示，组间均数经Levenne检验，以P<0.05定为有显著性差异。对经甲醛固定的标本采用免疫组织化学两步法检测Fibulin-5及蛋白的表达,其表达情况根据细胞染色面积和染色强度进行综合评分,所得结果采用Fisher确切概率法,相关性检验采用Sperman相关性分析法,以P<0.05定为有显著性差异。
　　结果：
　　⑴实时荧光定量PCR检测：眼眶IgG4相关性疾病与正常泪腺的患者相比，眼眶IgG4相关性疾病泪腺组织中Fibulin-5mRNA较正常泪腺明显增高。IgG4-ROD组中Fibulin-5mRNA的表达水平为3.69±1.72，而对照组中1.69±0.45,依据P<0.05的检验水准，两组比较差异有统计学意义（P<0.05）。⑵Western印迹法检测:Fibulin-5蛋白与Fibulin-5mRNA表达变化趋势较为一致。眼眶IgG4相关性疾病与正常泪腺的患者相比，眼眶IgG4相关性疾病泪腺组织中Fibulin-5蛋白较正常泪腺明显增高。IgG4-ROD组中Fibulin-5蛋白的表达为0.55±0.12，而对照组中Fibulin-5蛋白表达为0.19±0.11，按照P<0.05的检验水准，两组比较差异有统计学意义（P<0.01）。⑶免疫组织化学染色检测：Fibulin-5蛋白主要分布于细胞胞浆，阳性染色为黄色或棕黄色呈束状弥漫分布。免疫组化结果显示，IgG4-ROD组中泪腺细胞紊乱、部分破坏，染色为黄色、棕黄色的纤维化细胞排列紊乱，对照组中泪腺腺管规则，细胞规则排列，核染蓝色。IgG4-ROD组中Fibulin-5蛋白阳性率80%（16/20）,对照组中Fibulin-5蛋白阳性率22.5%（9/40）,按照P<0.05的检验水准，两组比较差异有统计学意义,IgG4-ROD组Fibulin-5蛋白的阳性表达显著高于对照组。
　　结论：
　　在Fibulin-5mRNA和蛋白水平的检测结果中均显示,眼眶IgG4相关性疾病与正常泪腺的患者相比，眼眶IgG4相关性疾病泪腺组织中Fibulin-5mRNA和蛋白表达较正常泪腺显著升高。

目录

声明

英文缩略词

前言

一、病因

二、病变临床表现特点

三、Fibulin-5与纤维化

材料和方法

1．实验仪器与试剂

1.1主要仪器

1.2主要试剂

1.3研究对象及分组

1.4 标本的采集和处理

2 实验方法

2.1实时荧光定量PCR检测

2.2 Western 印迹法

2.3 免疫组织化学染色

2.4 免疫组化结果判定

2.5统计学方法

结果

1 实时定量荧光PCR检测结果

2 Western blot检测结果

3免疫组织化结果

讨论

结论

参考文献

综述:基质蛋白Fibulin-5和泪腺占位性病变的研究进展

致谢

作者简介

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