大豆异黄酮对体外培养成骨细胞代谢作用的研究

摘要

目的:该研究以SI作用于新生SD大鼠颅骨OB,采用多次酶消化法分离培养原代OB,E<,2>作为实验对照组,通过测定生化指标及对细胞形态的观察,研究SI对OB增殖及分化等各方面的影响,并与E<,2>比较,探讨其机制,为SI预防治疗POP提供科学依据.方法:1.体外大鼠OB的分离及原代培养:取新生SD大鼠颅骨,采用多次酶消化法分离OB,进行原代体外培养,实验持续24天.Gomori钙钴法进行ALP染色鉴定OB.MTT法测定细胞增殖,绘制生长曲线.茜素红法进行矿化结节染色.2.SI对大鼠OB代谢作用的研究:采用第二继代OB进行实验.(1)剂量分组:实验分为正常对照组(Normal Control组),SI各浓度组(10<'-8>,10<'-7>,10<'-6>,10<'-5>M),实验对照组(E<,2>组,采用10<'-10>M的E<,2>).(2)SI对OB增殖、分化的影响:待细胞贴壁后,换加药培养基,作用48h及72h后,测定细胞MTT(OD).培养72h后,测定胞浆内蛋白含量、ALP及BGP含量.(3)SI对OB成骨能力的影响:待细胞贴壁后,换加药培养基,培养72h,测定细胞内Ⅰ型胶原合成情况.加药连续培养18天,茜素红染色,镜下计数各组矿化结节.(4)SI对OB合成TGF-β<,1>的影响:加药培养72h,测定细胞内TGF-β<,1>的含量.(5)SI对OB内游离Ca<'2+>的影响:待细胞贴壁后,换三组培养基(Normal Control组、E<,2>组、10<'-5>M SI组),培养72小时,测定细胞内游离Ca<'2+>水平.(6)SI对OB超微结构的影响:加药培养72小时(Normal Control组、E<,2>组、10<'-5>M SI组),透射电镜观察细胞超微结构.结论:1.以新生SD大鼠颅骨为原料,通过多次酶消化法分离得到较高纯度的原代OB,特征典型,数量较多,功能活跃,生长稳定.2.SI可刺激OB增殖、分化.高剂量的SI功能更强.3.SI可促进OB成骨功能,高剂量组作用更明显.4.SI可增加OB内TGFβ-1的分泌.5.SI不能影响OB内Ca<'2+>浓度.6.SI对OB的影响,在10<'-5>M-10<'-5>M范围内与剂量相关.7.E<,2>可刺激OB增殖分化,增加OB的成骨功能,可从细胞因子和钙离子通道方面影响OB.SI的作用与E<,2>相比,高浓度作用相似,而低浓度则低于E<,2>.

目录

英文缩写对照

前言

第一部分大鼠颅骨OB的分离及原代培养

材料与方法

结果

讨论

第二部分SI对体外大鼠OB代谢作用的研究

材料与方法

结果

讨论

小结

参考文献

致谢

综述 大豆异黄酮与骨质疏松