人参养荣汤对亚急性老化肝、脑细胞线粒体保护的机理研究

摘要

目的：衰老与人类寿命和死亡密切相关，它是一个复杂的生理过程，涉及许多领域。有关衰老的机理，学者们曾提出许多学说，其中自由基学说认为：引起人体衰老的主要原因是人体的细胞代谢过程中不断产生的自由基，它与活细胞大部分发生反应，损伤DNA分子，造成键断裂。过量自由基，促进膜内不饱和脂肪酸发生脂质过氧化反应，引起膜结构和生理功能紊乱，此为衰老的重要根源之一。 线粒体几乎存在于所有组织细胞内，它可以实现呼吸功能、能量转换及新陈代谢，是维持细胞以至整个机体生理活动的能量基础。近年来对线粒体分子生物学的深入研究发现：伴随增龄其结构、功能出现许多退行性变化，是逐步导致全身性生理功能下降的主要因素。因此以线粒体结构成分的衰变为中心，形成一种线粒体衰变循环学说。 机体老化是正常生理过程，长期临床与实验研究证实：不论是单味方，还是中药复方，都可以通过各种不同途径如抗脂质过氧化、消除自由基、改善循环功能、抗细胞凋亡等发挥抗衰老作用。故中医中药配伍得当，正确运用，对于防止和延缓衰老是完全可能的。传统中药抗衰老组方规律主要为调补以肾为主，或补后天以养先天两大类。而无论补肾还是益脾均以五脏六腑功能为基础构成要素，补阳、养阴、补气、理气、补血、活血、收涩、利湿、养血安神为主要配伍内容。此规律体现“治病求本，以平为期”这一中医最主要的防病、治病、抗老、防衰的根本指导思想。人参养荣汤为气血双补，以后天养先天之代表方剂。临床报道表明：它对于病后虚弱、贫血等气血两虚引发的症状有良好疗效。动物实验表明：它具有延缓自然老化鼠胃肠衰老，改善快速老化模型鼠肠黏膜形态的作用。为进一步探讨该方剂的抗衰老作用机制，我们选用亚急性衰老鼠为模型，通过血清酶学、组织病理学、形态计量学等方法围绕肝、脑组织与其细胞线粒体的检测来观察人参养荣汤对衰老动物抗氧化能力及其线粒体结构功能的影响。 方法：1.建立亚急性衰老小鼠模型，设立不同浓度中药观察组。2.通过对血清酶学SOD、MDA的测定，探讨人参养荣汤抗氧化作用机制。 3.通过组织病理、超微结构观察，探讨人参养荣汤对肝、脑组织细胞形态的影响： (1)通过对线粒体超微结构形态计量学定量分析，探讨人参养荣汤改善线粒体结构衰变的作用。 (2)通过对线粒体膜流动性及线粒体MDA的测定，探讨人参养荣汤对线粒体膜流动性的影响。 (3)通过对线粒体DNA片段缺失的测定，探讨人参养荣汤对线粒体DNA片段缺失的修复作用。 结果：1.成功建立亚急性衰老小鼠动物模型。模型鼠肝、脑组织生理学可见老化改变。电镜下可见该组织线粒体肿胀、嵴缺失，内质网扩张等衰老变化。血清酶学测定符合衰老鼠的血清改变。 2.模型鼠伴随血清SOD升高、MDA下降，线粒体膜流动性下降，线粒体MDA浓度升高；线粒体超微结构形态计量学统计表现为线粒体数目减少，总体积下降，线粒体肿胀，嵴减少，内膜面积减小。 3.人参养荣汤可有效改善衰变肝、脑组织与细胞生理学形态的老化损伤。 4.人参养荣汤可显著提高血清SOD活性，减低MDA含量。 5.人参养荣汤有效降低线粒体MDA含量，提高线粒体膜流动性。 6.人参养荣汤对线粒体损伤呈有意改善，即线粒体数目增多，总体积增大，肿胀减轻，嵴数目及内膜面积增大，以中药高浓度组效果最佳。 7.各组肝、脑线粒体DNA3867bp片段缺失检测，未发现缺失的出现。 结论：以颈部皮下注射D-半乳糖，成功模拟衰老动物模型。人参养荣汤改善高龄期气血两虚引发的诸多退行性体征的作用主要表现在：1.通过提高机体抗氧化酶SOD活性，增强体内清除自由基能力；抑制自由基代谢产物MDA的生成，减少脂质过氧化物在体内含量，减缓细胞退行性变。2.通过维持线粒体数目、嵴数目、线粒体总体积，减轻线粒体肿胀程度，保护线粒体结构及功能。3.通过降低线粒体MDA浓度，减轻脂质过氧化对细胞线粒体膜的损伤；改善线粒体膜蛋白构象变化，提高膜的有序性，维护线粒体膜的流动性。从而达到多靶点、综合性延缓衰老作用。

目录

英文缩略词表

实验流程图

前言

第一部分小鼠衰老模型的建立

第二部分人参养荣汤对亚急性衰老鼠抗氧化作用的研究

第三部分人参养荣汤对亚急性衰老鼠肝、脑组织形态学的影响

第四部分人参养荣汤对衰老肝、脑组织线粒体形态结构保护作用研究

第五部分人参养荣汤对线粒体膜流动性保护作用的研究

第六部分人参养荣汤对线粒体DNA片段缺失的影响研究

参考文献

病理图片

致谢