原发性肝癌中基因突变和变位剪接的初步研究

摘要

目的：研究原发性肝癌中p53基因、β-catenin基因的表达及其突变；hTERT基因、DNMT3b基因在肝癌中的表达及其变位剪接的情况；观察这4个基因在肝癌发生发展中的作用。 方法：以我实验室提取的RNA的反转录产物为实验标本，取其中29份经PCR检测P53基因、18份检测β-catenin、38份检测DNMT3b基因、17份检测hTERT基因。PCR产物行凝胶电泳，回收后经T-A克隆转化测序，并行寡聚核苷酸芯片杂交，检测这四种基因的表达及突变情况。 结果：PCR结果显示β-catenin基因在85.7％(6/7)的肝癌、100％(11/11)的癌旁组织有表达，表达强度在肝癌组与癌旁组无差异(p＞0.05)。p53基因在69.2％(9/13)的肝癌、81.3％(13/16)的癌旁组织中有表达，表达强度在两组无差异(p＞0.05)。DNMT3b基因以四种变位剪接体(DNMT3b1、DNMT3b3、DNMT3b4、DNMT3b5)的形式表达，其总的表达率为肝癌组92.3％(12/13)、癌旁组71.4％(10/14)、正常及慢性肝病组90.9％(10/11)。三组表达无统计学差异。其中DNMT3b1在正常及慢性肝病组中的表达高于肝癌组(p＜0.05)。DNMT3b4见于1例肝癌和1例癌旁组织，DNMT3b5见于1例肝癌组织，两者在正常及慢性肝病组均无表达。hTERT基因以四种变位剪接体(全长转录体、α剪接体、β剪接体及αβ剪接体)的形式表达，总的表达率为肝癌组90％(9/10)、癌旁组100％(4/4)，正常及慢性肝病组66.7％(2/3)，三组间表达无统计学差异。三组中，全长转录体在肝癌中表达率为66.7％，癌旁25％，正常及慢性肝病组0，虽无统计学意义，但有一个逐渐降低的趋势。DNA测序显示：β-catenin基因在肝癌中的突变率为0％(0/5)，癌旁组中突变率为36.4％(4/11)，两组无统计学差异(p＞0.05)。突变位点在密码子14、72、80。p53基因在肝癌中突变率为66.7％(4/6)，癌旁为50％(5/10)，两组相比无统计学差异，突变位点位于密码子232、234、235、236、244、248、258、259、273、275、279、305，大部分位于p53的5个保守区。寡聚核苷酸芯片杂交结果显示在根据文献报道设计的常见的p53基因的突变位点均未检测到突变型杂交信号，与测序结果一致。DNMT及hTERT基因均检测到四种变位剪接体的杂交信号。 结论：β-catenin基因在肝癌中未见突变，是否存在其他激活Wnt途径的机制尚需进一步观察；p53基因在肝癌中的表达及突变率与文献报道结果一致，其突变位点位于常见的5个保守区内，可能与肝癌的发生有关。DNMT3b以四种变位剪接体的形式表达，DNMT3b1在正常及慢性肝病组中表达高于癌组织，对维持良性细胞DNMT活性起一定作用。hTERT以四种变位剪接体的形式表达，全长转录体在正常及慢性肝病组、癌旁、肝癌组的表达呈上升趋势，是否对肝细胞由正常向肝癌的转变起一定的作用，需进一步研究。

目录

学位论文原创性声明及学位论文版权使用授权书

缩略词表

前 言

材料和方法

实验结果

讨 论

结 论

参考文献

附图表

致 谢