CD40 shRNA干扰CD40-CD40L在阻断共刺激通路作用的实验研究

摘要

目的:探讨CD40shRNA对DC表面抗原CD40表达的影响及shRNA干扰后DC诱导T淋巴细胞无能的机制。 方法:采用培养基选择方法体外培养小鼠骨髓源DC；经体外合成针对CD40mRNA序列特异性CD40shRNA，并构建于质粒载体，转染DC；荧光实时定量PCR、流式细胞仪检测转染前后CD40mRNA表达水平以及细胞表面抗原CD40、MHCⅡ、CD11c表达情况；混合淋巴细胞培养观察shRNA干扰对DC刺激T淋巴细胞增殖能力的影响，并以荧光实时定量PCR测定混合淋巴细胞培养反应体系中IL-12mRNA表达水平。 结果:经体外培养，每只小鼠可获1.5-2×107骨髓源DC；shRNA转染DC后，CD40mRNA表达水平明显减低，细胞表面抗原CD40阳性率由49.2％下降至16.9％，荧光实时定量PCR检测CD40mRNA抑制率49.7％；MHCⅡ、CD11c阳性率无明显变化；混合淋巴细胞培养结果显示，shRNA干扰后DC对T淋巴细胞刺激指数明显下降(P＜0.01)，且反应体系中IL-12mRNA表达水平抑制率为44.9％。 结论:培养基选择法可收获大量骨髓源DC，具有典型的形态、高表达MHCⅡ和共刺激分子；所获骨髓源DC能激活初始型T细胞启动免疫应答。以Lipofectamine2000转染针对CD40mRNA的shRNA质粒载体，效果可更持久并特异地抑制CD40表达。经RNAi敲减后DC激活异系淋巴细胞的能力降低，合成、分泌IL-12能力下降，并诱使Th细胞分化方向发生免疫偏离，诱导T细胞无能。

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摘要

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实验材料和方法

结 果

讨 论

小 结

参考文献

综述：RNA干扰及其应用

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