肺炎衣原体在HEp-2细胞中的发育周期及其感染对细胞迁移的影响

摘要

目的： 研究肺炎衣原体(Chlamdia pneumonia，C.pn)在体外培养中的增殖规律，了解其超微结构的变化，探讨C.pn在体外连续培养的方法；观察C.pn感染大鼠血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell，VSMC)及人喉癌细胞(HumanEpidermoid Carcinoma-2，HEp-2)后，对细胞迁移能力的改变。 方法： 1.C.pn感染HEp-2细胞，光镜下观察细胞病变，并用PCR技术鉴定其核酸。 2.荧光显微镜下观察感染24h、48h和72h后C.pn在HEp-2细胞内的形态变化。 3.透射电镜下观察感染24h、48h和72h后C.pn在HEp-2细胞内的超微结构变化。 4.应用组织培养半数感染量法测定C.pn感染导致HEp-2细胞病变程度。 5.应用MTT法检测C.pn感染VSMC、HEp-2细胞后，细胞活力的改变。 6.应用MTT法观察C.pn感染对VSMC、HEp-2细胞粘附能力的影响。 7.应用Wound-healing assay和Transwell assay观察C.pn感染对VSMC、HEp-2细胞迁移能力的影响。 结果： 1.在感染24～72h后，光镜下可见HEp-2细胞肿胀、脱落；在感染24h后，包涵体始见于HEp-2细胞胞浆内，至72h占据整个胞浆。PCR扩增出C.pn437bp的特异性片段。 2.荧光显微镜显示在不同时间点包涵体内由原体向网状体，而后再转变为原体的衍变过程。 3.透射电镜下观察到相似结果，并可见梨形原体及微型小体等C.pn特征性的超微结构。 4.与感染后84h、96h相比，感染后72h收集HEp-2细胞可获得高感染性的子代C.pn。 5.C.pn感染可以显著增强体外培养的VSMC、HEp-2细胞的活力，其最高增殖率分别达到171.54％、43.63％。 6.C.pn感染可显著增加VSMC、HEp-2细胞粘附于I型胶原的能力，其最高粘附率分别达到34.4％、19.9％。 7.C.pn感染可明显增强VSMC、HEp-2细胞的迁移能力。 结论： Cpn在HEp-2细胞内经72h完成一个发育周期，感染后72h可获得高感染性的C.pn用于连续传代；C.pn感染能促进VSMC和HEp-2细胞迁移。

目录

文摘

英文文摘

论文说明:符号说明

声明

前言

研究现状、成果

研究目的、方法

第一部分 肺炎衣原体发育周期的体外培养观察

1.1材料和方法

1.2结果

1.3 讨论

1.4小结

第二部分 肺炎衣原体感染对血管平滑肌细胞及HEp-2细胞迁移的影响

2.1材料和方法

2.2结果

2.3讨论

2.4 小结

结论

参考文献

发表论文和参加科研情况说明

综述 肺炎衣原体致动脉粥样硬化的作用机制

致谢