人参皂苷Rh2对荷结肠癌CT-26小鼠抗瘤作用及免疫指标的影响

摘要

目的：研究人参皂苷Rh2对荷瘤小鼠抗肿瘤作用及对免疫指标的影响，寻求抗肿瘤作用强而毒副作用小的中药有效成分。
　　 方法：首先进行肿瘤细胞系的培养传代。肿瘤细胞培养至一定数量时，用胰蛋白酶消化重悬，制备成肿瘤细胞悬液，接种于32只健康雌雄各半BALB/c小鼠右侧颈背部皮下，建立荷小鼠结肠癌CT-26动物模型。2周后动物肿瘤模型已稳定，除正常对照组外，将成瘤均匀且肿瘤大小相近的24只荷瘤小鼠模型随机分成3组：0.4％乙醇灌胃对照组、人参皂苷Rh2（0.4％乙醇混悬液）灌胃治疗组、5-FU腹腔注射治疗组。治疗21天后，各组小鼠称重，摘取小鼠眼球，收集血液标本，静置离心后吸取上层血清取样，Elisa（酶联免疫吸附）法测定各组小鼠血清IL-2水平，用酶标仪在450nm波长下测量各小鼠血清的OD（吸光度）值并用应用labsys雷勃酶标仪软件v5.01计算出各孔的IL-2浓度；剥取荷瘤小鼠皮下移植瘤标本，电子天平称重并做好记录，以计算各组荷瘤小鼠抑瘤率。然后取样，用10％福尔马林固定，标本用免疫组织化学染色后，在倒置显微镜下检测各组小鼠皮下移植瘤内CD25+细胞，早期凋亡肿瘤细胞Cleaved-caspase3表达情况；摘取各组小鼠胸腺、脾脏，电子天平称重后，做好记录，以计算各种小鼠胸腺指数及脾指数。
　　 结果：
　　 1.人参皂苷Rh2灌胃组与酒精灌胃对照组相比，其抑瘤率为81.76％，5-FU腹腔注射治疗组与酒精灌胃对照组相比，其抑瘤率为91.32％。
　　 2.人参皂苷Rh2对荷结肠癌小鼠皮下移植瘤内的早期凋亡肿瘤细胞表达Cleaved-caspase3的影响：人参皂苷Rh2灌胃组与酒精灌胃对照组相比，小鼠皮下移植瘤内的早期凋亡肿瘤细胞Cleaved-caspase3表达率明显增加（P<0.01），具有显著统计学意义。
　　 3.人参皂苷Rh2（0.4％乙醇混悬液）灌胃治疗组与5-FU腹腔注射治疗组相比，小鼠皮下移植瘤内的早期凋亡肿瘤细胞Cleaved-caspase3表达率不及后者（P<0.01）。
　　 4.5-FU腹腔注射治疗组同人参皂苷Rh2灌胃组、酒精灌胃对照组相比胸腺指数、脾脏指数、血清IL-2水平均明显降低（P<0.05）。
　　 5.人参皂苷Rh2对荷结肠癌小鼠的免疫器官的影响：在该实验中人参皂苷Rh2灌胃组与酒精灌胃对照组相比，小鼠的胸腺指数、脾脏指数差异无统计学意义（P>0.05）。
　　 6.人参皂苷Rh2对荷结肠癌小鼠的细胞因子的影响：人参皂苷Rh2灌胃组与酒精灌胃对照组相比，小鼠的血清IL-2水平差异无统计学意义（P>0.05）。
　　 7.人参皂苷Rh2对荷结肠癌小鼠皮下移植瘤内的CD25+细胞的影响：人参皂苷Rh2灌胃组与酒精灌胃对照组相比，小鼠皮下移植瘤内的CD25+细胞浸润无明显增多（P>0.05）。
　　 8.小鼠荷瘤以后，胸腺指数、脾脏指数、血清IL-2水平均较正常小鼠降低（P<0.05），与前人动物实验结果一致。
　　 结论：人参皂苷Rh20.4mg/kg（0.4％乙醇混悬液）经口服能够显著抑制小鼠结肠癌CT-26肿瘤细胞生长，增加小鼠皮下移植瘤内的早期凋亡肿瘤细胞Cleaved-caspase3阳性表达率，促进小鼠结肠癌CT-26肿瘤细胞凋亡，但作用不及5-FU。从毒副作用方面来说，人参皂苷Rh20.4mg/kg经口服在发挥抗肿瘤作用的同时没有抑制荷瘤小鼠免疫功能。但对提高荷小鼠结肠癌CT-26小鼠胸腺指数、脾指数血清IL-2水平，肿瘤局部CD25+细胞阳性表达率也无明显作用。