一氧化氮与一氧化氮合酶对心肌的保护作用

摘要

目的：
　　 观察缺血再灌注与缺血后处理时心肌一氧化氮（NO）生成量与一氧化氮合酶（NOS）活性。使用NOS激动剂与抑制剂后，测定大鼠心脏乳酸脱氢酶活性、心肌梗死面积。探讨NO与NOS在缺血后处理心肌保护机制中的作用。
　　 方法：
　　 将48只Wistar大鼠随机分成4组，建立Langendorff离体心脏灌注模型。对照组用Kreb’s液灌注，心脏保持持续工作状态10 min，缺血30 min，再灌注120 min；实验组用Kreb’s液灌注，全心缺血30 min后，再灌注30 s后，缺血30 s，反复3次，然后持续灌注117 min；激动剂组（再灌注损伤+L-Arg）全心肌缺血30 min，再灌注120 min。灌流液为1mmol/L L-Arg的Krebs液；抑制剂组（缺血后处理+L-NNA）全心肌缺血30 min，再灌注30 s，梗死30 s，重复3次后再灌注117 min。灌流液为1mmol/L L-NNA的Krebs液。
　　 再灌注结束时，TTC染色观察心肌梗死面积，高压液相色谱仪（HPLC）分析心肌组织中NO生成量与NOS活性，采用紫外分光光度法测定乳酸脱氢酶活性。
　　 结果：
　　 1.缺血再灌注与缺血后处理时LDH活性和心肌梗死面积比较
　　 实验组心肌释放的LDH活性显著低于对照组（P<0.01）。与对照组相比，实验组心肌梗死面积缩小（P<0.05）。
　　 2.缺血再灌注与缺血后处理时心肌NO生成量与NOS活性比较
　　 实验组NO生成量及NOS活性均高于对照组（P<0.05）。
　　 3.NOS激动剂及抑制剂对心肌细胞的影响。
　　 NO生成量实验组及抑制剂组高于对照组（P<0.05），激动剂组低于实验组（P<0.05）；实验组心肌组织NOS活性高于激动剂组与抑制剂组（P<0.05）；实验组、激动剂组及抑制剂组LDH活性及心脏梗死面积均显著低于对照组（P<0.05）；实验组心肌组织LDH活性及心脏梗死面积低于抑制剂组（P<0.05）。
　　 结论：
　　 1.后处理能够缩小心肌梗死面积；减少缺血再灌注损伤心肌细胞LDH的释放，对缺血再灌注损伤心肌具有保护作用。
　　 2.后处理时，因其对再灌注损伤心肌细胞的保护，存在于内皮细胞上的eNOS较缺血再灌注时多，故而后处理时NO生成量及NOS活性均高于缺血再灌注时。
　　 3.缺血后处理时，心脏NO生成量与NOS活性均高于缺血再灌注时，心脏损伤程度也较缺血再灌注低；使用NOS抑制剂后，缺血后处理对心脏的保护程度减弱；使用NOS激动剂后，缺血再灌注对心脏的损伤降低。
　　 4.本实验结果表明，使用NOS激动剂L-Arg可提高心肌NOS活性与NO生成量，同时心肌也受到了一定的保护；而NOS抑制剂L-NNA不仅降低了NOS活性与NO生成量，也减弱了后处理对心肌的保护作用。据此，推测NO在缺血后处理保护心肌机制中有一定作用，为进一步研究后处理保护缺血再灌注损伤心肌的机制提供新的线索。使用NOS激动剂可保护再灌注损伤心肌，对临床治疗心梗患者有一定的指导意义。