Legumain在人眼眶横纹肌肉瘤中的表达及其与肿瘤侵袭性的关系

摘要

目的：
　　 1.检测人眼眶横纹肌肉瘤（rhabdomyosarcoma，RMS）组织中legumain的表达，观察legumain的表达与RMS生物学行为之间的关系。并对横纹肌肉瘤患者的多个临床指标与患者预后进行多因素分析，对影响生存率的独立因素进行分析讨论。
　　 2.检测经不同浓度的转化生长因子β（transforming growth factorβ，TGF-β）刺激之后人胚胎型RMS细胞系RD细胞中legumain及α-平滑肌肌动蛋白（α-smoothmuscle actin，α-SMA）表达的变化，探讨legumain在RD细胞中的作用，为肿瘤的治疗提供新的思路和策略。
　　 方法：
　　 1.应用免疫组化SP法检测56例人眼眶RMS患者手术标本中legumain的表达，并引入年龄、性别、组织学类型、肿瘤大小、是否累及眼睑等因素进行统计学分析，观察各因素与患者预后的关系。
　　 2.首先利用细胞免疫荧光法检测legumain在RD细胞中的表达情况，并使用不同浓度的TGF-β对RD细胞进行刺激，通过RT-PCR以及Western-blot技术检测刺激前后legumain及α-SMA在RD细胞中表达的变化。
　　 结果：
　　 1.legumain在56例RMS组织中有25例高表达，并且其表达高低、肿瘤大小、组织学类型、是否累及眼睑等因素是影响横纹肌肉瘤患者生存率的独立临床因素。
　　 2.通过细胞免疫荧光法检测到RD细胞中存在legumain的表达，并且legumain及α-SMA的表达在2.5ng/ml的TGF-β刺激后较正常对照组明显升高，而5ng/ml刺激后RD细胞中legumain及α-SMA的表达较正常对照组明显降低。
　　 结论：
　　 1.legumain在RMS组织中具有较高的表达，检测人眼眶RMS组织中legumain的表达有望成为判断肿瘤恶性程度以及患者预后的生物学指标，并为以后临床治疗眼眶RMS提供实验基础。
　　 2.Legumian低表达、肿瘤≤5cm、胚胎型RMS、肿瘤未累及眼脸的病人均具有较高生存率。而患者的年龄、性别因素与患者的预后无关。
　　 3.低浓度的TGF-β刺激提高了RD细胞中legumain及α-SMA的表达，而高浓度的TGF-β刺激降低了RD细胞中legumain及α-SMA的表达，由于低浓度的TGF-β可以促进RD细胞的生长，而高浓度的TGF-β可以通过某种途径抑制RD细胞的生长，因此，legumain可能通过某种途径参与了TGF-β调控RD细胞生长的环节，从而增加了肿瘤细胞的侵袭性。